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艾柏森生物
- 服务名称:
Northern Blot实验
| 步骤 | 服务内容 | 服务描述 |
| 1 | 实验方案设计 | 根据客户提供的RNA相关信息设计恰当的实验方案 |
| 2 | 样品制备与处理 | 培养细胞并从中取得细胞总RNA(如有需要可再经纯化柱得到总的mRNA) |
| 3 | 琼脂糖凝胶电泳 | 依据RNA的大小,分离不同RNA |
| 4 | 转膜 | 在电场作用下将带有负电荷的RNA转移至带有正电荷的膜上;随后以紫外交联等方法加以固定。 |
| 5 | 杂交 | 以标记好的探针和上述膜一起孵育杂交;以专业仪器检测荧光;得出结果 |
| 6 | 结果分析 | 结合阴性对照等分析实验结果,得出目的基因表达量变化等信息。 |
| 实验报告 | 交付以上每一步骤中具体结果与细节;可以根据客户需求定制服务(比如每一步所用试剂等信息) |
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文献和实验miRNA Northern Blot实验步骤 1975年,英国科学家埃德温·迈勒·萨瑟恩(Edwin Mellor Southern)创建了Southern Blot技术用于检测DNA。基于同样的原理,1977年由斯坦福大学的James Alwine、David Kemp和George Stark开发出了用于检测RNA的Northern Blot技术,至今仍然是一种经典的RNA检测技术。 miRNA在不同组织中丰度变化大,例如,miR-133在骨骼肌中表达很高,在心肌中
蛋白质翻译抑制,进而抑制蛋白质合成,阻断mRNA的翻译。也有miRNA可以与目标靶基因完全互补,从而抑制基因的表达,提示miRNA可能包含和 siRNA类似的作用方式。 随着miRNA研究的不断深入,各种研究方法层出不穷,包括miRNA芯片、Real time-PCR、Northern Blot、RNA酶保护实验等等。而在这些方法中最经典方法的当属miRNA Northern Blot,miRNA Northern Blot具有结果直观、可靠等方面的优势,因此许多SCI杂志要求miRNA方面
一、经乙二醛和二甲基亚砜变性处理后进行的RNA电泳 这一方法原于McMaster和Carmichael(1977)。 含有乙二醛-DMSO的凝胶比含有甲醛的凝胶更难于进行电泳,因为前者泳动速率较慢而且需将电泳液时行循环以避免电泳过程中形成过高的H+梯度。尽管上述两种凝胶具有近乎相等的分辨率(Miller,1987),但用含朋乙二醛-DMSO的凝胶对RNA进行分级离,通常Northern杂交所显示的RNA条带更为锐利。 1、 在灭菌的微理离心
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