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详见说明书
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详见说明书
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上海邦景
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低温冷藏
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50U/200U/1000U
产品名称:高保真KOD试剂盒价格
英文名称:
产品规格:50U/200U/1000U
发货周期:1~3天
KOD DNA polymerase 是从克隆有α –型高保真DNA聚合酶的大肠杆菌中分离纯化所得,具有3`→5`核酸外切酶活性,保真性能比普通Taq聚合酶高80倍。具有较高的延伸速率,在推荐的条件下大于每分钟2kb,PCR产物为平端,可与直接接入本公司Blunt平端连接载体中。用于高保真、快速扩增目标DNA,环拉法引入点突变,补平DNA粘性末端等。
注意事项:
1. 整个操作过程动作要尽量轻柔,勿用力吹打细胞,尽量在4℃下操作。
2. 反应完毕后请尽快检测,反应1 小时后荧光强度就开始衰变。
3. Annexin V-FITC 和 Propidium iodide 是光敏物质,在操作时请注意避光。
4. 试验操作过程中佩戴手套等防护用品。
5. 试验开始前将一定量的 10×Annexin V Binding Buffer 用超纯水(1:9)稀释至 1×备用。
:1. 样品染色
1) 将Binding Buffer(10×)稀释成1×Binding buffer工作液备用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml无菌去离子水)。
2) 对于悬浮细胞,500-1000g离心5min收集细胞。
对于贴壁细胞,要用不含EDTA的胰酶消化细胞,胰酶消化时间不宜过长或过短,最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时,加入细胞培养液,将细胞轻轻吹打下来,转移到离心管内,500-1000g离心5min收集细胞。
3) 收集细胞后,加入预冷PBS溶液轻摇或用移液器轻柔吹打洗涤,离心收集细胞,共洗涤两次。
4) 在细胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重悬细胞,使细胞浓度达到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl细胞悬液(细胞总数为1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,轻轻混匀,室温避光孵育15min。
2. 样品检测
1) 流式细胞仪检测:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混匀后使用流式细胞仪检测(1小时内检测)。
建议设置经凋亡诱导的正常细胞、PI单染和Annexin V-FITC单染3个对照组,正常细胞组可作为荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。结果可用CellQuest等软件进行分析,绘制双色散点图(two-color dot plot),FITC为横坐标,PI为纵坐标。Annexin V-FITC和PI联合使用时,活细胞仅有很低强度的背景荧光,早期凋亡细胞仅有较强的绿色荧光,晚期凋亡细胞有绿色和红色双重荧光。
2) 荧光显微镜检测:
染色孵育后涂片,显微镜下观察。使用荧光显微镜上的蓝光和绿光通道分别观察FITC和PI。被Annexin V-FITC结合的细胞显示浆膜上有绿色光环。丧失细胞膜完整性的细胞,细胞核显示红色,膜上有绿色光环。
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1本基3甲基5吡唑酮5U2~8℃
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琼脂糖凝胶4B蛋白A,英文名或英文缩写:Protein ASepharose 4B, Fast Flow from Staphylococcus aureus,级别:BR,97%,腐蚀品,规格:100克
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TRISBUFFEREDSALINE(TBS)TAETSTBS片超级白色圆片RTsigma
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文献和实验PCR(Polymerase Chain Reaction) 即聚合酶链式反应,对于常年狂奔在实验室的实验狗来说并不陌生。那么,对于 PCR 反应的核心成份,DNA 聚合酶,你选对了吗? 常见的 DNA 聚合酶如 Taq、Phanta、Pfu、KOD、Primerstar、Klenow、Bst、Phi29 等等。根据耐热性来分可分为耐热酶和常温酶。耐热聚合酶如 Taq、Pfu、KOD、Primerstar 等,常温聚合酶包括 Klenow、Bst、Phi29 等。根据保真度来分,高保真聚合
PCR 新手指南——手把手教您如何正确选择合适的 PCR 酶
重要。为了确保准确进行 DNA 拷贝,请确保选择高保真 DNA 聚合酶。高保真 PCR 酶具有 3'-5’ 核酸外切酶校对活性。当结合错误匹配的碱基对时,DNA 聚合酶停顿,导致合成暂延。合成暂延 允许去除错误匹配的核苷酸并使用正确的核苷酸取代。 保持序列准确的 DNA 聚合酶的绝佳选择是 Invitrogen SuperFi 或 Thermo Scientific Phusion 高保真DNA聚合酶。这两种酶具有高保真度,准确度是 Taq DNA 聚合酶的 300 倍或 52 倍,并且具有很高的产率。 Q
: Taq\KOD DNA聚合酶菌株转让 V: TRIZOL配方// GC buffer配方 VI: 蛋白预染MARKER制备工艺 VII: DNA凝胶回收试剂盒配方 分享请加: QQ, 861389636; 或来信, Email:biogm@126.com
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