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- 2025年07月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
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22
- 英文名：
详见说明书
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
50管/48样
1．γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)测试盒(可见分光光度法)规格用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
中文名称：γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)测试盒(可见分光光度法)规格英文名称：详见说明书
产品规格：50管/48样
发货周期：1～3天
发货周期：1～3天
测定意义:
γ-GT是γ-谷氨酰循环中的关键酶，是GSH降解关键酶。γ-GT催化转移GSH或者其他γ-谷氨酰基化合物上的γ-谷氨酰基到受体。此外，催化GSH和其他γ-谷氨酰基化合物的水解，产生谷氨酸盐，在细胞外谷胱甘肽新陈代谢中起了重要的作用。
γ-GT广泛存在与动物、植物和微生物中。其中，哺乳动物肾、胰、肝、肠和脑组织中活性较高。在胆汁淤积、炎症等刺激下，肝脏合成γ-GT增加，其活性改变对于肝胆系统疾病的诊断具有一定的价值。进行尿、血γ-GT检测，有利于肾病与尿路感染的鉴别，也有利于肾病与肝胆胰等其它疾病的鉴别。特定的条件下，γ-GT会大量释放到血液中，这一性质在临床可用来检测组织细胞是否发生了病变，同时还可以作为细胞分化、细胞老化的有效检测指标。
测定原理：
γ-GT催化谷氨酰对硝基胺中γ-谷氨酰基转移给N-甘氨酰甘氨酸，生成对硝基胺；通过检测对硝基胺数量，即可计算γ-GT酶活性。
实验中所需仪器及设备：
可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1ml比色皿、双蒸水
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
注意事项：
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验化酶电极法、总蛋白( TP) 双缩脲法、清蛋白(Alb) 溴甲酚紫法、镁(Mg) Calmagite 比色法,试剂及校准品由贝克曼公司提供;总胆红素( TB) 矾酸盐氧化法、直接胆红素(DB) 矾酸盐氧化法、丙氨酸氨基转移酶(AL T) 速率法、天门冬氨酸氨基转移酶(AST) 速率法、碱性磷酸酶(AL P) 速率法、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT) 速率法、淀粉酶(AMY) 法、胆固醇(CHO) 氧化酶法、三酰甘油( TG) CPO-PAP 法、肌酸激酶(CK) 速率法、乳酸脱氢酶(LDH) 速率法、尿酸
肝硬化。在复制过程中，自股动脉取血作肝功能试验，包括血清蛋白测定、浊度试验、转氨酶、乳酸脱氢酶（LDH）、单胺氧化酶(MAO)、５'-核苷酸酶(5'-NA)、γ-谷氨酰转肽酶(γ－GT)及胆硷酯酶。分批处死动物进行尸解，观察腹水，心、肝、脾、肺肾等器官形态,用4％甲醛溶液固定,石蜡包埋,切片厚5微米,进行HE、网状纤维（Gordon与Sweet法)、胶原纤维（Van Gieson 法)及弹力纤维(Weiger法)染色。在采用上述剂量D-氨基半乳糖长期多次注入大鼠腹腔时，动物耐受性较好。逐渐出现进食活动减少
调节至7.0，以250mg/kg的剂量行腹内注射，每天一次，每周6天，约半年左右即可形成肝硬化。 在复制过程中，自股动脉取血作肝功能试验，包括血清蛋白测定、浊度试验、转氨酶、乳酸脱氢酶（LDH）、单胺氧化酶（MAO）、5'-核苷酸酶（5'-NA）、γ-谷氨酰转肽酶（γ-GT）及胆硷酯酶。分批处死动物进行尸解，观察腹水，心、肝、脾、肺肾等器官形态，用4%甲醛溶液固定，石蜡包埋，切片厚5微米，进行HE、网状纤维（Gordon与Sweet法）、胶原纤维（Van Gieson 法）及弹力纤维（Weiger法）染色
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