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57
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详见说明书
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详见说明书
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上海邦景
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低温冷藏
- 规格:
20T|200T
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
②生物膜与细胞器的研究。
③细胞骨架体系的研究。
④细胞增殖及其调控。
⑤细胞分化及其调控。
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
⑦细胞的起源与进化。
⑧细胞工程。
产品名称:TUNEL检测阳性对照制备试剂盒(可配套TUNEL系列试剂盒使用)图片
英文名称:
产品规格:20T|200T
发货周期:1~3天
TUNEL 检测同时需要设阳性和阴性对照,以显示试验的客观性及准确性。可使用本试剂盒制备阳性片(使用客户自备样本),其后续步骤与待测样本同样进行。
使用方法:
1. 悬浮细胞,2000rpm离心5min收集细胞;对于贴壁细胞,要用不含EDTA的胰酶消化细胞,胰酶消化时间不宜过长或过短(过长细胞膜破碎,造成假阳性,过短,细胞黏连影响检测)最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时,吸除胰酶消化液,加入细胞培养液终止消化,2000rpm离心5min收集细胞。
2. 4℃预冷PBS,洗涤细胞2次(2000rpm x 5min),收集细胞2~5×105 。
3. 离心弃上清,加入500μL结合缓冲液,轻轻吹打重悬细胞。
4. 加入5μL Annexin V-FITC,轻轻吹打混匀,加入5μL PI 轻轻吹打混匀,室温避光孵育5-15min。(PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,时间允许,可以在检测前5分钟加入PI)
5. 流式细胞仪检测或荧光显微镜观察。最好在1h内检测。
注意事项:
TUNEL检测阳性对照制备试剂盒(可配套TUNEL系列试剂盒使用)图片尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响,但为取得良好的使用效果,3-6个月内推荐4℃保存,并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染,会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶,需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC,导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭,在进行荧光观察时,尽量缩短观察时间,同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时,如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞,并且通过调整相关设置和参数也无法改善,可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测,这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
细胞培养的优点:
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
微量可调八道移液器P101克2~8℃
四氧化三钴 Tricobclt tqtrcoxidq 08061
2Chloro4metxylpxenylhydrezine xy7nochloride 906302
5茚酮 5Chloro1indanone,99% 1G 通用试剂
葡聚糖T500/葡聚糖D500/右旋糖酐500/Dextran T500 BR,分子量50万 10克 Pharmacia 032001
维生素B61KU2~8℃
6241基苄酯Benzyl carbamate
3,5二扶/3,5二扶嘧啶,英文名或英文缩写:3,5Difluoropyridine,级别:CP,规格:500克
四甘醇 Tetraglycol 320 100G 通用试剂
氧化镧 LcnthcnuM oxidq;LcnthcnuM trioxidq;LcnthcnuM sqsquioxidq
L亮酸盐酸盐1公斤
63十六烷;鲸蜡烷Hexadecane;Alkane C;Bioctyl;
CYCLOPREP,2IN1ISOLATIONKITPCR产物化试剂盒生物技术级50 reactionsRT
苯 1Chloro2fluorobenzene,99% 35 5G 通用试剂
聚二醇2000/二醇聚醚2000/聚二醇2000/PPG CP 250克 国产/进口
K562/Adr 人白血病阿霉素耐药株
MCF-7/Adr 腺癌/阿霉素耐药株
PATU-8988/FU 人胰腺癌尿嘧啶耐药
BIU-87/Adr 人膀胱癌阿霉素耐药株
TUNEL检测阳性对照制备试剂盒(可配套TUNEL系列试剂盒使用)图片HCT-8/V? 人结肠癌长春新碱耐药株
CL-0115Hs 746T(人胃癌细胞)5×106cells/瓶×2
人前列腺平滑肌细胞(HPSMC)(5×105)
小鼠源细胞 大鼠晶状体上皮细胞完全培养基 100mL
犬胸腺细胞;cf2Th
INHBA Others Mouse 小鼠 Activin A 人细胞裂解液 (阳性对照)
培养操作:
1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取.
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文献和实验碧云天凋亡试剂盒hoechst33258染色,他们认为细胞发生凋亡时,染色质会固缩。 所以Hoechst染色时,细胞核会呈致密浓染,或呈碎块状致密浓染。正常细胞核刺激后有致密浓染的凋亡细胞The image below shows human lymphoma cells treated with the chemotherapy agent camptothecin. The cells that are undergoing apoptosis appear yellow
:一个试剂盒 50T 试剂盒存储/稳定性:未开封试剂盒储存于-15~-25℃可稳定至标签上标明的效期。 试剂 TUNEL 反应混合物 转化-POD 储存和稳定性 TUNEL 反应混合物应在用前临时配制,不能储存 TUNEL 反应混合物用前应置于冰上 一旦融化转化-POD 溶液后,应储存于 2-8℃(最长稳定 6 个 月) 注意:禁止冰冻结冰 优点: 优点 灵敏 特异 快速 简便 灵活 特点 在单个细胞水平检测细胞凋亡的早期间断 对坏死来说,优先标记凋亡 分析
在胞质中以单体形式存在,发出绿色的荧光。可以在荧光显微镜下,或流式检测。采用488nm激发,其检测波长分别是527nm和590nm。整个实验过程操作简单,只需要30min就可以见到结果。Caspase家族可以检测的分子非常多,也有不少商业的试剂盒可以应用。即使没有相应的试剂盒,只要有相应抗体基本上是可以检测的,具体的方法是参照细胞内蛋白检测的步骤。在细胞凋亡过程中伴随着一系列的形态特征改变,细胞膜的改变是这些特征中较早出现的一种。在凋亡细胞中,细胞膜磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜的内侧翻转到细胞
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