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- 2025年07月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
44
- 英文名：
Neuraminidase Inhibitors Screen Kit
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
详见说明书
1．神经氨酸酶抑制剂筛选试剂盒说明书用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
中文名称：神经氨酸酶抑制剂筛选试剂盒说明书英文名称：Neuraminidase Inhibitors Screen Kit
产品规格：100次
发货周期：1～3天
发货周期：1～3天
本试剂盒是一种用荧光法快速高灵敏度高通量筛选神经氨酸酶抑制剂的试剂盒。本试剂盒可以筛选溶解于水的抑制剂，也可以筛选溶解于甲醇、乙醇、DMSO的抑制剂。其它溶剂未经测试。用于96孔板检测时，一个包装的本试剂盒可以检测100个样品或标准品。
试剂盒组分：
神经氨酸酶检测缓冲液—————10ml
神经氨酸酶——————————1ml
神经氨酸酶荧光底物——————1ml
注意事项：
Milli-Q水———————————1.2ml
禽流感病毒在其外壳上有两种糖蛋白，一种是haemagglutinin，简称HA，另一种是neuraminidase，简称NA，也称唾液酸酶(sialidase)。目前治疗H5N1型禽流感的常见药物包括瑞士罗氏制药公司的Oseltamivir (Tamifu，达菲为其商品名)和葛兰素史克公司(GlaxoSmithKline)的Zanamivir (Relenza，瑞乐砂为其商品名)，这两种药物都是neuraminidase的抑制剂。但达菲价格昂贵，普通百姓很难承受。并且达菲能力有限，如果发生较大规模的禽流感疫情，该药物的供给量有限。另外，在一些禽流感疫情中已经发现了达菲耐受的禽流感病毒，在达菲的临床测试中就发现存在一些对达菲耐受的禽流感病毒。Zanamivir不能口服，使应用范围受到限制。因此，寻找新的神经氨酸酶抑制剂作为治疗禽流感的药物非常迫切。希望本试剂盒能有助于寻找到更好的价廉物美的禽流感药物。
试剂盒中提供了纯化的神经氨酸酶和可以被神经氨酸酶催化产生荧光的底物，并且对神经氨酸酶的用量和底物的使用量进行了优化。不仅能检测出IC50很低的抑制剂，也能检测出IC50较高的抑制剂。
注意事项：
1. 神经氨酸酶和神经氨酸酶荧光底物尽量避免反复冻融。
2. 试剂盒中所用溶液溶解后4℃保存，两天有效。如果两天内不能全部用完，建议尽早把留作以后使用的神经氨酸酶和神经氨酸酶荧光底物适当分装后-70℃保存，-20℃冻存也可，但有效期会较短。其余试剂直接-20℃或-70℃保存即可。
3. 需使用荧光酶标仪，并需自备专门用于荧光酶标仪荧光检测的96孔荧光酶标板。或使用可以检测小体积样品的荧光分光光度计。使用荧光分光光度计时参考荧光酶标板的操作方法。
4. 由于荧光检测非常灵敏，测定出来的荧光强度有时容易产生波动。一方面要避免灰尘等掉入检测孔中产生荧光干扰，另一方面所有检测最好在同一块检测板上做双份平行检测甚至三份平行检测。
储存条件：-20℃，有效期一年。
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
注意事项：
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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alpha-2-HS-Glycoprotein格列脲
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文献和实验人基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)ELISA试剂盒 说明书
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