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- 文献和实验
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27
- 英文名:
Copper-zinc superoxide dismutase (CuZn-SOD) assay kit
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海研生
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
详见说明书
待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称:植物铜锌超氧化物歧化酶测试盒(比色法)说明书
英文名称:Copper-zinc superoxide dismutase (CuZn-SOD) assay kit
产品规格:100管/48样
发货周期:1~3天
发货周期:1~3天
检测指标:植物铜锌超氧化物歧化酶;CuZn-SOD
本试剂盒采用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase SOD)活力,可测不同植物的根、茎、叶等样本中SOD活力。植物体中SOD可分为3 种类型:即铜锌-SOD(CuZn-SOD)、锰-SOD(Mn-SOD)和铁-SOD(Fe-SOD)。低等植物以Fe-SOD 和Mn-SOD 为主,高等植物以CuZn-SOD为主,CuZn-SOD主要位于细胞质和叶绿体中,Mn-SOD主要位于线粒体中,Fe-SOD一般位于一些植物的叶绿体中。三者相加等于总SOD(T-SOD)。经样本前处理过的样本中Mn-SOD和Fe-SOD活力丧失,但CuZn-SOD活力不变。
产品优点如下:
1、快速简便:全程约50分钟,可测100例左右样本。
2、灵敏度高:IC50=0.05g/ml,是邻苯三酚法的18倍。
6、受外界影响因素小:干扰因素少,重复性强。
3、稳定性好:试剂盒2~8℃存放6个月有效。
4、再现性好:变异系数CV=1.7%。
5、回收试验: X =103.3%。
6、受外界影响因素小:干扰因素少,重复性强。
【培养指南】
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类:
第一种:
是冻存产品,由液氮直接拿出,干冰运输给客户。一般不推荐这种,也较少使用这种方式,因为复苏手法对于细胞状态影响较大,一旦细胞状态不好,很难说是细胞自身不行,还是复苏没操作好;另外温度对细胞、基因功能状态影响很大,也不是细胞储存的zui好方式,快递时间也很难控制,多种因素影响产品的质量;干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种:
是我们复苏好细胞,QC通过后,T-25灌满培养基常温运输给客户,排除复苏造成影响,常温运输也对细胞影响也不大,只需加25元运费(顺丰)。
质量保证:我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,购买到货后,由我们实验室扩增、冻存,冻存的产品全部经过QC检测,100%进口来源,100%保证5代以内,活力>95%,无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作,不同的实验室采用的方法略有差异,但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
Alastrim Virus类天花病毒探针法荧光定量PCR试剂盒73069-25-710X Taq Buffer with (NH4)2SO4 and 20 mM MgCl24x1.25 ml猪脂蛋白脂酶(LPL)免疫试剂盒
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Alcaligenes faecalis粪产杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒13159-28-910X Reaction Buffer with MgCl2 for DNase I1 ml猪脂蛋白α(Lp-α)免疫试剂盒
Alcaligenes faecalis粪产杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒472-15-150X TAE Buffer (Tris-acetate-EDTA)1 l猪正常T细胞表达和分泌因子(RANTES/CCL5)免疫试剂盒
Alcelephine Herpesvirus 1(AlHV-1狷羚疱疹病毒1型PCR试剂盒6035-49-010X TBE Buffer (Tris-borate-EDTA)1 l猪粘膜血管地址素细胞黏附分子1(MADCAM1)免疫试剂盒
ScabiosideC规格:HPLC≥98%,标准品501-36-010X Taq Buffer without Detergent4x1.25 ml猪粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)免疫试剂盒
SC514规格:>98%,BRphospho-TYK3(Tyr402)英文名称RSPH4A转录因子EYA1抗体
S-Benzyl-L-cysteine规格:>98%,BRTRPM1英文名称RGMA酸化埃兹蛋白抗体
SB-505124规格:>98%SB-431542规格:>98%TGF-β抑制剂TRPM6英文名称Repulsive Guidance Molecule B嗜酸性粒细胞阳离子蛋白抗体
SB3-18规格:BRTMEM2L英文名称RGMC/Repulsive Guidance Molecule CE1A样分化抑制因子3抗体
植物铜锌超氧化物歧化酶测试盒(比色法)说明书protein Z20(R)人参皂苷Rg3
Protein S甜菊糖
Protein C表小檗
PIN1甜橙素
Elastasee刺五加苷E
elastin3-酰基乳香酸
Bile acide芹菜素
cholicacid没食子儿茶素
cholinesterase熊果酸
Choline acetyltransferase紫草素
操作步骤(仅供参考):
1、植物铜锌超氧化物歧化酶测试盒(比色法)说明书贴壁细胞的消化
①吸除培养液,用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution,略盖过细胞即可,室温放置 0.5~2min, 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足,则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落, 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000~2000g 离心 1min,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。
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bin1986 最近在做凋亡,在用凯基的caspase-3分光光度法试剂盒检测 细胞经过与药物孵育24小时后检测 用酶标仪检测,OD值在0.1-0.3之间,有一定浓度依赖,高浓度下caspase-3的活化程度有差不多4 问题在于,我用BCA蛋白定量得到的蛋白浓度时30多ug/ul,我加了有250ug,如果按照说明书的话,这个OD值应该在1左右,而我的最高才0.3.另外我的control孔(没加药)与我最低
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