Protein A+G Agarose (Fast Flow

一篇搞定 IP、co-IP 实验

，该对照组称为output 组。 内源性 co-IP 实验，如果最终结果为阳性，则可以证明两个蛋白之间存在相互作用；但是结果为阴性，是否两个蛋白就一定不发生相互作用了了呢？也不一定。有可能是两个蛋白是弱相互作用力，这时候可能需要交联剂协助，锁定强化弱互作蛋白；也有可能是内源蛋白表达量低，可先做过表达 co-IP 作为对照。 实验前的思考 1、抗体----选经过 IP 验证的抗体，减少假阳性概率 2、抗体结合蛋白---Protein A, Protein G, Protein A/G, Protein

Chromatin IP (CHIP assay)

and measure protein concentration (BioRad assay) use 1 - 5 mg protein per IP immunoprecipitate for 2 h to ON, 4 °C wash immunoprecipitations pelleting the beads each time:      2 x 1 ml CHIP lysis buffer      2 x 1 ml CHIP

免疫共深沉（Co-IP）

一、原理： 免疫共沉淀（co-immunoprecipitation，Co-IP）技术是检测蛋白质间相互作用的经典方法,基本原理是以细胞内源性靶蛋白为诱饵，将靶蛋白抗体与细胞总蛋白进行共孵育，促进免疫复合物的形成；随后加入能够与抗体Fc段结合的proreinA/G（预先结合固化在琼脂糖小珠上），形成“结合蛋白-靶蛋白-靶蛋白抗体-proteinA/G小珠”复合物，纯化该复合物后凝胶电泳分离蛋白，应用Westernblot或者质谱技术鉴定靶蛋白的结合蛋白。 与其它研究方法相比，免疫