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40
- 英文名：
详见说明书
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详见说明书
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上海邦景
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低温冷藏
- 规格：
0.75ml
产品名称：脂质体2000Invitrogen原装价格
英文名称 Lipofectamine?2000TransfectionReagent
储存条件 2-8℃
单位盒
Lipofectamine2000转染试剂是一种多用途转染试剂，可在各种贴壁和悬浮细胞系中提供高效转染。研究人员可使用Lipofectamine2000试剂进行基于siRNA和shRNA的基因敲除实验及基因表达研究。Lipofectamine2000是LifeTechnologies提供的用于siRNA和质粒DNA共转染的最佳试剂。
采用Lipofectamine2000试剂，您可以实现：
使用方法:
1. 悬浮细胞，2000rpm离心5min收集细胞;对于贴壁细胞，要用不含EDTA的胰酶消化细胞，胰酶消化时间不宜过长或过短(过长细胞膜破碎，造成假阳性，过短，细胞黏连影响检测)最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时，吸除胰酶消化液，加入细胞培养液终止消化，2000rpm离心5min收集细胞。
2. 4℃预冷PBS，洗涤细胞2次（2000rpm x 5min）,收集细胞2～5×105 。
3. 离心弃上清，加入500μL结合缓冲液，轻轻吹打重悬细胞。
4. 加入5μL Annexin V-FITC，轻轻吹打混匀，加入5μL PI 轻轻吹打混匀,室温避光孵育5-15min。(PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,时间允许，可以在检测前5分钟加入PI)
5. 流式细胞仪检测或荧光显微镜观察。最好在1h内检测。
细胞生物学研究有以下几个方面。
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
②生物膜与细胞器的研究。
③细胞骨架体系的研究。
④细胞增殖及其调控。
⑤细胞分化及其调控。
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
⑦细胞的起源与进化。
⑧细胞工程。
细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
L型细菌高渗盐增菌培养基250g用于L型细菌增菌培养
Phosphate Buffer, pH 7.2 incubation media Phosphate Buffer, pH 7.2
大秃马勃 支/瓶
PlateCountAgar
CzapekDoxAgar
RVS肉汤250g用于食品中沙门氏菌检验选择性增菌(ISO标准)
布氏杆菌种子培养基 250g 用于布氏杆菌菌种复活、传代
结晶紫中性红胆盐琼脂 (VRBA) Violet Red Bile Agar 250 用于大肠菌群的固体平板检测(SN标准)
尿道感染显色培养基l/瓶用于临床样本中引起尿道感染微生物的检测incubationmedia尿道感染显色培养基l/瓶用于临床样本中引起尿道感染微生物的检测
PH6.8PhosphateBufferedSaline
10129 m-TGE 肉汤 250g/瓶 用于滤膜法测定奶制品中的菌落总 数 incubation media 10129 m-TGE 肉汤 250g/瓶 用于滤膜法测定奶制品中的菌落总 数
10131 AC 肉汤 250g/瓶 用于常见微生物的培养和不含防腐 剂的样品的检测 incubation media 10131 AC 肉汤 250g/瓶 用于常见微生物的培养和不含防腐 剂的样品的检测
10124 2216E 液体培养基 250g/瓶 用于海生细菌的增菌培养 incubation media 10124 2216E 液体培养基 250g/瓶 用于海生细菌的增菌培养
10812 胰蛋白胨大豆肉汤(TSB) 250g/瓶 用于细菌的增菌、培养 incubation media 10812 胰蛋白胨大豆肉汤(TSB) 250g/瓶 用于细菌的增菌、培养
人胎盘羊膜细胞完全培养基 100mL
人胎盘滋养层细胞完全培养基 100mL
人胎盘绒毛膜细胞完全培养基 100mL
人平滑肌细胞完全培养基 100mL
脂质体2000Invitrogen原装价格细胞名称 种属
CM-H024人胰腺星状细胞完全培养基100mL
大鼠颗粒细胞(RGC)(1×106)
615小鼠癌瘤株;Ca759 小鼠卵巢上皮细胞完全培养基 100mL
SV40T转化的人胚肾细胞;293T
EPHA4 Others Mouse 小鼠 EPHA4 / HEK8 人细胞裂解液 (阳性对照)
培养操作：
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取.
注意事项：
脂质体2000Invitrogen原装价格尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
英文名称 Lipofectamine?2000TransfectionReagent
储存条件 2-8℃
单位盒
Lipofectamine2000转染试剂是一种多用途转染试剂，可在各种贴壁和悬浮细胞系中提供高效转染。研究人员可使用Lipofectamine2000试剂进行基于siRNA和shRNA的基因敲除实验及基因表达研究。Lipofectamine2000是LifeTechnologies提供的用于siRNA和质粒DNA共转染的最佳试剂。
采用Lipofectamine2000试剂，您可以实现：
使用方法:
1. 悬浮细胞，2000rpm离心5min收集细胞;对于贴壁细胞，要用不含EDTA的胰酶消化细胞，胰酶消化时间不宜过长或过短(过长细胞膜破碎，造成假阳性，过短，细胞黏连影响检测)最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时，吸除胰酶消化液，加入细胞培养液终止消化，2000rpm离心5min收集细胞。
2. 4℃预冷PBS，洗涤细胞2次（2000rpm x 5min）,收集细胞2～5×105 。
3. 离心弃上清，加入500μL结合缓冲液，轻轻吹打重悬细胞。
4. 加入5μL Annexin V-FITC，轻轻吹打混匀，加入5μL PI 轻轻吹打混匀,室温避光孵育5-15min。(PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,时间允许，可以在检测前5分钟加入PI)
5. 流式细胞仪检测或荧光显微镜观察。最好在1h内检测。
细胞生物学研究有以下几个方面。
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
②生物膜与细胞器的研究。
③细胞骨架体系的研究。
④细胞增殖及其调控。
⑤细胞分化及其调控。
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
⑦细胞的起源与进化。
⑧细胞工程。
细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
L型细菌高渗盐增菌培养基250g用于L型细菌增菌培养
Phosphate Buffer, pH 7.2 incubation media Phosphate Buffer, pH 7.2
大秃马勃 支/瓶
PlateCountAgar
CzapekDoxAgar
RVS肉汤250g用于食品中沙门氏菌检验选择性增菌(ISO标准)
布氏杆菌种子培养基 250g 用于布氏杆菌菌种复活、传代
结晶紫中性红胆盐琼脂 (VRBA) Violet Red Bile Agar 250 用于大肠菌群的固体平板检测(SN标准)
尿道感染显色培养基l/瓶用于临床样本中引起尿道感染微生物的检测incubationmedia尿道感染显色培养基l/瓶用于临床样本中引起尿道感染微生物的检测
PH6.8PhosphateBufferedSaline
10129 m-TGE 肉汤 250g/瓶 用于滤膜法测定奶制品中的菌落总 数 incubation media 10129 m-TGE 肉汤 250g/瓶 用于滤膜法测定奶制品中的菌落总 数
10131 AC 肉汤 250g/瓶 用于常见微生物的培养和不含防腐 剂的样品的检测 incubation media 10131 AC 肉汤 250g/瓶 用于常见微生物的培养和不含防腐 剂的样品的检测
10124 2216E 液体培养基 250g/瓶 用于海生细菌的增菌培养 incubation media 10124 2216E 液体培养基 250g/瓶 用于海生细菌的增菌培养
10812 胰蛋白胨大豆肉汤(TSB) 250g/瓶 用于细菌的增菌、培养 incubation media 10812 胰蛋白胨大豆肉汤(TSB) 250g/瓶 用于细菌的增菌、培养
人胎盘羊膜细胞完全培养基 100mL
人胎盘滋养层细胞完全培养基 100mL
人胎盘绒毛膜细胞完全培养基 100mL
人平滑肌细胞完全培养基 100mL
脂质体2000Invitrogen原装价格细胞名称 种属
CM-H024人胰腺星状细胞完全培养基100mL
大鼠颗粒细胞(RGC)(1×106)
615小鼠癌瘤株;Ca759 小鼠卵巢上皮细胞完全培养基 100mL
SV40T转化的人胚肾细胞;293T
EPHA4 Others Mouse 小鼠 EPHA4 / HEK8 人细胞裂解液 (阳性对照)
培养操作：
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取.
注意事项：
脂质体2000Invitrogen原装价格尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验相关实验
Invitrogen的王牌：Lipofectamine 2000转染试剂
步骤快速简便： (1)DNA-阳离子脂质体试剂的复合体可以直接加入到细胞培养 基中，有血清也不怕 (2)转染后不需要除去Lipofectamine 2000试剂，无需换培养基 操作流程 事实上Lipofectamine系列产品操作流程都是又快又简单：稀释DNA以及Lipofectamine 2000，混合2种稀释液保温20分钟，加入培养细胞中孵育24-96小时检测结果。下面是Invitrogen提供的详细流程和注意事项。 转染前一天，胰酶
相关专题 总有一种转染方法适合你 请问脂质体2000能转染 Hela细胞吗? 答1.应该是可以的，但是脂质体2000的细胞毒性的确比较大，如果细胞比较敏感的话不建议使用。罗氏的FugeneHD细胞毒性比较小，而且效率也高，特别是对原代细胞，肿瘤细胞和干细胞 。悬浮细胞的话还是电转吧。 答2.可以，用脂质体2000转染 Hela细胞，没感觉对Hela细胞毒性大，而且转染效果在70%以上。有过在转染过程中要注意
1.应该是可以的，但是脂质体2000的细胞毒性的确比较大，如果细胞比较敏感的话不建议使用。罗氏的FugeneHD细胞毒性比较小，而且效率也高，特别是对原代细胞，肿瘤细胞和干细胞。悬浮细胞的话还是电转吧。2.可以，用脂质体2000转染Hela细胞，没感觉对Hela细胞毒性大，而且转染效果在70%以上。有过在转染过程中要注意边加入边摇晃液体，以免脂质体2000对局部细胞产生毒性作用。
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