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上海邦景
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低温冷藏
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25mg
1. 悬浮细胞,2000rpm离心5min收集细胞;对于贴壁细胞,要用不含EDTA的胰酶消化细胞,胰酶消化时间不宜过长或过短(过长细胞膜破碎,造成假阳性,过短,细胞黏连影响检测)最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时,吸除胰酶消化液,加入细胞培养液终止消化,2000rpm离心5min收集细胞。
2. 4℃预冷PBS,洗涤细胞2次(2000rpm x 5min),收集细胞2~5×105 。
3. 离心弃上清,加入500μL结合缓冲液,轻轻吹打重悬细胞。
4. 加入5μL Annexin V-FITC,轻轻吹打混匀,加入5μL PI 轻轻吹打混匀,室温避光孵育5-15min。(PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,时间允许,可以在检测前5分钟加入PI)
5. 流式细胞仪检测或荧光显微镜观察。最好在1h内检测。
细胞生物学研究有以下几个方面。
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
②生物膜与细胞器的研究。
③细胞骨架体系的研究。
④细胞增殖及其调控。
⑤细胞分化及其调控。
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
⑦细胞的起源与进化。
⑧细胞工程。
产品名称:DCFH-DA活性氧ROS荧光探针规格
有效期 1年
溶解性溶于DMSO
别名 二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯
英文名称 2′,7′-Dichlorofluorescindiacetate
CAS4091-99-0
分子式C24H16Cl2O7
分子量487.28
储存条件-20℃
纯度≥97%
注意事项:
DCFH-DA活性氧ROS荧光探针规格尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响,但为取得良好的使用效果,3-6个月内推荐4℃保存,并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染,会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶,需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC,导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭,在进行荧光观察时,尽量缩短观察时间,同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时,如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞,并且通过调整相关设置和参数也无法改善,可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测,这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
培养操作:
1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取.
法国科玛嘉显色培养基M0l/瓶
Peptone Bacteriological Neutralised 中性细菌学蛋白胨 Oxoid 500g incubation media Peptone Bacteriological Neutralised 中性细菌学蛋白胨 Oxoid 500g
绿色木霉=木素木霉 支/瓶
FB2EnrichmentBroth
AntibioticAgarNO.4
DoubleLactoseBileMedium
肠道菌计数琼脂(VRBDA) 250(g) incubation media 肠道菌计数琼脂(VRBDA) 250(g)
改良Y培养基 Y Medium Modified 250克 分离小肠结肠炎耶尔森氏菌
D/E中和琼脂250用于卫生环境中微生物的分离培养(ACUMEDIA方法)incubationmediaD/E中和琼脂250用于卫生环境中微生物的分离培养(ACUMEDIA方法)
四酸盐煌绿增菌液基础(TTB) 250g 用于沙门氏菌选择性增菌培养,需加入煌绿和碘液
11903 MS 培养基(1/2 蔗糖) 250g/瓶 蔗糖 15g/L,用于植物组织培养 incubation media 11903 MS 培养基(1/2 蔗糖) 250g/瓶 蔗糖 15g/L,用于植物组织培养
11904 1Kg/袋 incubation media 11904 1Kg/袋
11905 MS 培养基(1/2 蔗糖、不含琼脂) 250g/瓶 蔗糖 15g/L,不含琼脂,用于植物 组织培养 incubation media 11905 MS 培养基(1/2 蔗糖、不含琼脂) 250g/瓶 蔗糖 15g/L,不含琼脂,用于植物 组织培养
11906 1Kg/袋 incubation media 11906 1Kg/袋
RL95-2, 人内膜腺癌细胞系
Ca Ski, 人细胞
MCF-7 [MCF7], 人癌细胞系
Raw264.7, 小鼠单核巨噬细胞白血病细胞
DCFH-DA活性氧ROS荧光探针规格CSC, 小鼠心肌细胞 Mouse
CM-R024大鼠淋巴成纤维细胞完全培养基100mL
人脂肪间充质干细胞(脂肪)(HMSC-ad)(5×105)
小鼠肾集合管细胞(SV40转化);M-1 小鼠小肠血管内皮细胞完全培养基 100mL
人红系白血病细胞;TF-1
SPARC Others Mouse 小鼠 SPARC / BM-40 人细胞裂解液 (阳性对照)
细胞培养的优点:
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
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文献和实验1、现在做肿瘤细胞内ROS水平测定,使用流式细胞仪测DCF荧光强度,应该用什么做对照呢?就是这种肿瘤细胞的正常细胞做对照吗?可不可以用任意的正常组织细胞做对照呢?或者只用PBS加DCFH-DA作为空白对照呢? 据经验,DCFH-DA本身没有荧光,可穿过细胞膜进入细胞,在胞内转化生成DCFH。在活性氧作用下,DCFH被氧化生成荧光物质DCF,荧光强度与细胞内活性氧水平成正比。你是要测定细胞内活性氧水平,做的是流式细胞检测。建议你设立2组
resonance(EPR,电子顺磁共振谱)Detection of ROS(活性氧类物质/活性氧)by election paramagnetic resonance(EPR,电子顺磁共振谱)(胰腺组织的ROS生成)。(2) ; ;DCF法: dichlorofluorescein (DCF)二氯荧光黄[1,8,13]活性氧检测试剂盒是利用荧光探针DCFH-DA进行活性氧检测的。DCFH-DA本身没有荧光,可以自由穿过细胞膜,进入细胞内后,可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜,从而使
活性氧检测试剂盒(Reactive oxygen species assay kit)是一种利用荧光探针DCFH-DA进行活性氧检测的试剂盒。DCFH-DA本身没有荧光,可以自由穿过细胞膜,进入细胞内后,可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜,从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。 本试剂盒提供了活性氧阳性对照试剂Rosup以便于活性氧的检测。Rosup是一种混合
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