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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
54
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详见说明书
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海邦景
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
500ml
储存条件 RT,有效期 1年
单位 瓶
使用方法:
1. 悬浮细胞,2000rpm离心5min收集细胞;对于贴壁细胞,要用不含EDTA的胰酶消化细胞,胰酶消化时间不宜过长或过短(过长细胞膜破碎,造成假阳性,过短,细胞黏连影响检测)最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时,吸除胰酶消化液,加入细胞培养液终止消化,2000rpm离心5min收集细胞。
2. 4℃预冷PBS,洗涤细胞2次(2000rpm x 5min),收集细胞2~5×105 。
3. 离心弃上清,加入500μL结合缓冲液,轻轻吹打重悬细胞。
4. 加入5μL Annexin V-FITC,轻轻吹打混匀,加入5μL PI 轻轻吹打混匀,室温避光孵育5-15min。(PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,时间允许,可以在检测前5分钟加入PI)
5. 流式细胞仪检测或荧光显微镜观察。最好在1h内检测。
细胞生物学研究有以下几个方面。
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
②生物膜与细胞器的研究。
③细胞骨架体系的研究。
④细胞增殖及其调控。
⑤细胞分化及其调控。
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
⑦细胞的起源与进化。
⑧细胞工程。
注意事项:
EBSS,不含钙镁,含酚红价格尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响,但为取得良好的使用效果,3-6个月内推荐4℃保存,并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染,会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶,需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC,导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭,在进行荧光观察时,尽量缩短观察时间,同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时,如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞,并且通过调整相关设置和参数也无法改善,可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测,这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
细胞培养的优点:
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
培养操作:
1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取.
察氏培养基2250g用于培养能以盐作为氮源的真菌和细菌,及青霉和曲霉等霉菌的分离培养和形态鉴别
Nutrient Agar 营养琼脂 Oxoid 500g incubation media Nutrient Agar 营养琼脂 Oxoid 500g
蜜粘褶菌=革裥菌 支/瓶
LST发酵管(含小导管)20支/包每管10ml
AntibioticAgarNO.9
OsmophilicMycophileAgar
叠葡萄糖肉汤 250(g) incubation media 叠葡萄糖肉汤 250(g)
SOB琼脂 SOB Agar 250克 BR
改良0酸盐缓冲液PSB250用于小肠结肠炎耶尔森氏菌冷增菌培养(GB标准)incubationmedia改良0酸盐缓冲液PSB250用于小肠结肠炎耶尔森氏菌冷增菌培养(GB标准)
琼脂 250g 用于霍乱弧菌的选择性分离培养
1号抗生素培养基(Seed 琼脂) (CM0327) Oxoid incubation media 1号抗生素培养基(Seed 琼脂) (CM0327) Oxoid
霍乱菌培养基TCBS (CM0333) Oxoid incubation media 霍乱菌培养基TCBS (CM0333) Oxoid
Mueller-Hinton 琼脂 (CM0337) Oxoid incubation media Mueller-Hinton 琼脂 (CM0337) Oxoid
MRS 肉汤 (CM0359) Oxoid incubation media MRS 肉汤 (CM0359) Oxoid
L1210 小鼠白血病细胞
Lewis 小鼠肺癌细胞
LM-8 小鼠骨肉瘤
M1 小鼠白血病细胞
EBSS,不含钙镁,含酚红价格b16 小鼠黑色素瘤细胞
CL-0155ME-180(人子宫颈表皮癌细胞)5×106cells/瓶×2
人尿道上皮细胞(HUC)(5×105)
人非小细胞肺腺癌细胞;NCI-H1975 大鼠视网膜微血管内皮细胞完全培养基 100mL
小鼠髋动脉内皮细胞;PIEC
5E Others Human 人 5E / CD73 人细胞裂解液 (阳性对照)
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文献和实验4 , 47.5 mg/L Na2 HPO4 , 调pH至7.2. HBSS一共分为四种,含钙镁,含酚红;含钙镁,不含酚红;不含钙镁,含酚红(D-Hanks );不含钙镁,不含酚红(D-Hanks)。此四种产品可根据客户需要自己选择。而如果客户无法判断应该选择哪一种,可以选不含钙镁,不含酚红(D-Hanks )。 Hanks’ 含钙镁 含酚红 Hanks’
动物细胞培养中Hanks液、D-Hanks液和消化液的配制方法
则是无钙镁离子的Hanks液。BSS与细胞生长状态下的pH值、渗透压及无菌状态一致,且配方简单,是组织培养基本用液,常用于配制培养基及其他用液,或洗细胞等,细胞在BSS中可生存几个小时。 胰蛋白酶(胰酸)溶液是一种常用的细胞消化液,原代培养 时用于处理组织块,使细胞分离下来。传代时用胰蛋白酶使培养细胞离开所贴附的培养瓶表面,并分散成单个细胞。胰蛋白酶主要采自牛或猪的胰脏,呈白色粉末状,易潮解,应在低温干燥处保存。胰酶的活力常用一份胰酶解离酪蛋白的份数表示,常用胰酶活力为1:125或1:250。本实验
细胞在培养30分钟左右即可肉眼观察到明显的显色反应,培养3.5-4小时左右检测效果最佳。总之原则就是把OD值控制在1.0左右。 7.实验时尽量多设置复孔,取平均值。实验时把OD值控制在1.0左右。因人为造成的数据不稳定只能通过增大样品数,借助数据处理来弥补。另外实验操作一定要仔细小心,尽量平行操作。 8.CCK-8的检测依赖于脱氢酶催化的反应,如果待检测体系中存在较多的还原剂,例如一些抗氧化剂会干扰检测,需设法去除。含有酚红的培养基不影响本试剂盒做细胞活性的测定。 9.如何判定待测溶液是否有还原性?不含
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