- ￥1480
- 翌圣生物（Yeasen）
- 60220ES08
- 上海
- 2025年12月20日
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
粉末-20 ℃避光保存/储存液-20 ℃避光保存
- 保质期：
粉末/有效期3年,储存液/有效期1年
- CAS号：
108321-42-2
- 库存：
大量
- 英文名：
G418 Sulfate(Geneticin)
- 供应商：
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 规格：
5g
哺乳动物细胞中，当抗性基因neo被整合进真核细胞基因组后 ,使其编码表达氨基糖苷磷酸转移酶（amino-glycoside 3’-phosphotransferase，APH(3')II）。此酶通过共价修饰G418的氨基或羟基功能，抑制抗生素-核糖体间的相互作用，从而使得抗生素失活。这一特性赋予细胞产生抗性。稳转细胞株筛选实验，需要建立杀灭曲线（剂量反应曲线）确定杀死无抗性细胞的最低有效浓度。
植物细胞中，通过转染携带nptII基因的抗性质粒孵育其抗性。nptII基因也能编码表达氨基糖苷磷酸转移酶，这个酶使得多种抗生素丧失活性，包括G418，卡那霉素和巴龙霉素。
产品性质
| 英文同义名（English synonym） 中文同义名（Chinese synonym） | Antibiotic G418; G418 Sulfate; G418硫酸盐；遗传霉素； |
| CAS号（CAS No.） |
108321-42-2
|
| 分子式（Molecular formula） | C20H40N4O10·2 H2|SO|4 |
| 分子量（Molecular weight） | 692.7 |
| 外观（Appearance） | 白色粉末 |
| 纯度（Purity） | ~98% |
| 活力（Potency）（anhydrous） 溶解性（Solubility） | >700 U/mg 溶于水 |
| 结构式（Structure） |  |
常温运输。-20℃避光保存，有效期3年。避免受潮，否则会降低抗生素活力。
使用方法
1. G418储存液的配制（50 mg/mL，活性浓度）
1）活力单位的换算
根据此公式进行换算：（1000/A0）×A1=A2，其中A0是G418的活力值（Potency），因批次而异。可见批次对应的质检报告，或者瓶子上的标签。A1是想配制的活性G418浓度。A2是实际称重的粉末与体积比浓度。
比如若所用批次的G418 活力值为：750 U/mg，要配制50 mg/mL的G418活性浓度，则实际要配制的粉末浓度为1000/750×50 mg/mL=66.33 mg/mL。
如果配制10 mL的G418储存液（活性浓度，50 mg/mL），则需要称取663.3 mg粉末。
2）除菌和保存
根据上述换算得到的实际粉末称重量，加入10 mL无菌去离子水内使其完全溶解。
先用5 mL无菌去离子水预湿润0.22 μm针头式过滤器，除尽水。之后使用此滤器过滤，除菌后分装成单次使用的小量（如1mL）放到-20℃冻存，1年稳定。
【注】：①不要对混浊的溶液进行过滤，因为混浊的溶液意味着未完全溶解，过滤过程中会造成药物损失，降低终液的活性。②不建议使用液体培养基，NaCl,磷酸盐溶液或者有机溶剂来制备储存液。
2. 常用筛选浓度
一般来说，刚开始筛选转化子需要高浓度的G418，并用一个较低浓度的G418用于维持培养。生长条件，细胞类型和其他的环境因素都可能影响G418的用量，因此第一次使用的实验体系建议通过杀灭曲线（kill curve），即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。
通常情况，哺乳动物细胞筛选范围200-2000 μg/mL；植物细胞：10-100 μg/mL；酵母细胞：500-1000 μg/mL；
以下是一些细胞类型使用G418筛选使用的浓度，可做参考。
| 细胞类型 | 激活浓度 | 应用 | 引用文献 |
| 网柄菌属 | a) 10 μg/mL b) 30 μg/mL | a）培养在培养液中； b）培养在冻干细菌上； | Hirth,et. al., Proc. Natl. Acad. Sci., v. 79, 7356-7360 (1982). |
| 哺乳动物 | a) 400 -1000 μg/mL b) 200 μg/mL | a）用于筛选 b）用于维持生长 | Canaani and Berg, Proc. Natl. Acad. Sci., v. 79, 5166-5170 (1982). |
| 植物 | a) 25-50 μg/mL b) 10 μg/mL | a）用于筛选 b）用于维持生长 | Ursic, et. al., Biochem. Biophys. Res. Comm., v. 101:3, 1031-1037 (1981). |
| 酵母 | a) 500 μg/mL b) 125-200 μg/mL | a）用于筛选 b）用于维持生长 | Jimenez and Davies, Nature, v. 287, 869-871 (1980). |
| 细菌 | 8-16 μg/mL | 用于筛选 | Waitz, et. al., Antimicrob. Agents Chemother., v. 6:5, 579-581 (1974). |
【注】：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素最低浓度，可通过建立杀灭曲线（剂量反应曲线）来实现，至少选择6个浓度。处理分裂期的细胞时G418的活性最强，因此在添加G418之前需要让细胞培养一段时间。
1) 第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜；
【注】：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。
2) 根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定0，50，100，200，400，800，1000 μg/mL。
3) 第二天：去除旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4) 接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5) 按照固定的周期（如每2天）进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数（通常是7-10天）内能够杀死绝大多数细胞的最低浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
4. 稳定转染细胞的筛选
1) 转染48 h后，用含有适当浓度的G418筛选培养基来传代细胞（直接传代或者稀释后传代）。
【注】：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤效果最好。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，最好将细胞稀释至丰度不超过25%。
2) 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3) 筛选7天后观察并评估细胞克隆（集落）的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。
4) 挑取并转移5-10个抗性克隆于35 mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5) 之后更换正常培养基培养即可。
注意事项
1) 本品不可高压灭菌；
2) G418不要和其他的抗生素/抗真菌剂（如青霉素/链霉素）共同使用，因为它们是G418的竞争性抑制剂。其他的抗生素也会产生交叉活性。
3) 配制G418溶液时，一定要根据G418批次不同的活力值（potency）来进行换算，从而得到需要活性浓度的储存液以及工作液。
4) G418加入培养体系中未转染的细胞有可能不会被杀死，原因在于药物浓度过低，或者细胞密度过高。另外，快速分裂的细胞相对于缓慢增殖细胞，更容易被杀死。对照细胞（未转染）可能抗生素添加5-7天后才能杀死，转染细胞（抗性克隆子）的克隆需要10-14天形成。
5) 即使加入杀死剂量的G418，细胞可能会继续分裂2-3次。G418的药效通常在2天后才变得明显。
6) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
- 作者
- 内容
- 询问日期
文献和实验[1] Zhu G, Xie J, Kong W, et al. Phase Separation of Disease-Associated SHP2 Mutants Underlies MAPK Hyperactivation. Cell. 2020;183(2):490-502.e18. doi:10.1016/j.cell.2020.09.002(IF:38.637)
[2] Zhang D, Liu Y, Zhu Y, et al. A non-canonical cGAS-STING-PERK pathway facilitates the translational program critical for senescence and organ fibrosis. Nat Cell Biol. 2022;24(5):766-782. doi:10.1038/s41556-022-00894-z(IF:28.824)
[3] Zhou C, Yi C, Yi Y, et al. LncRNA PVT1 promotes gemcitabine resistance of pancreatic cancer via activating Wnt/β-catenin and autophagy pathway through modulating the miR-619-5p/Pygo2 and miR-619-5p/ATG14 axes. Mol Cancer. 2020;19(1):118. Published 2020 Jul 29. doi:10.1186/s12943-020-01237-y(IF:27.401)
[4] Meng F, Yu Z, Zhang D, et al. Induced phase separation of mutant NF2 imprisons the cGAS-STING machinery to abrogate antitumor immunity. Mol Cell. 2021;81(20):4147-4164.e7. doi:10.1016/j.molcel.2021.07.040(IF:17.970)
[5] Zhou C, Liang Y, Zhou L, et al. TSPAN1 promotes autophagy flux and mediates cooperation between WNT-CTNNB1 signaling and autophagy via the MIR454-FAM83A-TSPAN1 axis in pancreatic cancer. Autophagy. 2021;17(10):3175-3195. doi:10.1080/15548627.2020.1826689(IF:16.016)
G418通过干扰核糖体的功能而阻断细胞的蛋白合成 G418 G418是一种氨基糖苷类抗生素 ,这种氨基糖类抗生素的结构和新霉素、庆大霉素、卡那霉素相似，在分子遗传试验中,是稳定转染最常用的抗性筛选试剂。它通过抑制转座子Tn601，Tn5的基因,干扰核糖体功能而阻断蛋白质合成,对原核和真核等细胞产生毒素 ,包括细菌、酵母、植物和哺乳动物细胞 ,也包括原生动物和蠕虫。当neo基因被整合进真核细胞DNA后 ,则能启动neo基因编码的序列转录为ｍＲＮＡ ,从而获得抗性产物氨
问：G418筛选预实验用未转染的细胞做，选10-14天内细胞死亡的最小浓度，然后将更高一级别的浓度应用于转染的细胞，是这样吗？答：G418是一种细胞毒性药物（氨基糖苷类抗生素），依不同浓度，对细胞有一定的抑制或杀伤作用，而拟转染的质粒上带有G418的药代酶，能降解G418，从而使细胞获得对G418的耐药性。也就是说转染后的细胞可以耐受G418，而未转染成功的细胞不能耐受G418，因而被杀灭或抑制。通过G418筛选体系，使得未转染成功的细胞比例不断减少，转染成功的细胞比例不断增高。如果G418
相关专题 问：G418筛选预实验用未转染的细胞做，选10-14天内细胞死亡的最小浓度，然后将更高一级别的浓度应用于转染的细胞，是这样吗? 答：G418是一种细胞毒性药物(氨基糖苷类抗生素)，依不同浓度，对细胞有一定的抑制或杀伤作用，而拟转染的质粒 上带有G418的药代酶，能降解G418，从而使细胞获得对G418的耐药性。也就是说转染后的细胞可以耐受G418，而未转染成功的细胞不能耐受G418，因而被杀灭或抑制
