金担子素A(AbA)试剂(≥95%)北京厂家

特别提示：包括金担子素A(AbA)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：金担子素A(AbA)
英文名称：Aureobasidin A；AbA
产品货号：QN0001
产品规格：1mg

本品是从丝状真菌Aureobasidium pullulans No. R106中分离出来的环酯肽类抗生素，具有很强的抗真菌能力。在较低的浓度下(0.1～0.5 μg/ml)即可对酵母产生毒性。对其敏感的真菌种类包括：出牙酵母、粟酒裂殖酵母、光滑念珠菌、构巢曲霉和黑曲霉。作用机制在于AbA抑制了真菌生长所依赖的肌醇磷酰胺合成酶的活性，干扰鞘脂合成，从而进一步杀死菌株。编码IPC合成酶的基因研究较多的有来自酿酒酵母菌的AUR1 基因，以及构巢曲霉的AURA基因，两者具有同源性。通过对这些编码基因进行突变即可使得菌株对AbA产生抗性，如AUR1-C基因。

分子式：C60H92N8O11
分子量：1100
纯度：≥95%
熔点：155-157℃
储存条件：冰袋运输，4℃保存

AbA非常适合用作阳性克隆子筛选用的药物选择性标记。AbA抗性也是酵母单/双杂交研究中理想的报告子。本品为溶于甲chún的AbA溶液，浓度为1mg/ml。具体的工作浓度取决于宿主细胞的敏感度(见表1. AbA对各种酵母菌的最低抑菌浓度(MIC))。

操作步骤(抗AbA的酵母转化系统)
1)加入0.5ml过夜培养的酵母到50ml YPD培养基中(配方：1L液体培养基含有10g yeast extract，20g polypeptone， 20g D-glucose;固体培养基另外加入2%琼脂;)。
2)30℃培养约6小时，测定OD660为1～2。使用二倍体时，测定OD660为2～4。
3)1,000×g离心5分钟。
4)用10ml Solution A(配方：100 mM Lithium acetate，10 mM Tris-HCl pH 7.5，1 mM EDTA)悬浮沉淀，1,000×g离心5分钟。
5)用Solution A重悬沉淀，直到OD660为150。
6)在管内分取100 µl细胞悬浮液，30℃培养1小时。
7)加入5 μg载体(环状或线性DNA)和150 μg Carrier DNA(已经过100℃加热10分钟，并迅速冷却)。
【注】：pAUR101需使用线性DNA进行转化。使用环状DNA会降低转化效率甚至转化不成功。pAUR112和pAUR123需使用完整的质粒DNA进行转化。
8)加入850 µl Solution B(配方：取40 g Polyethylene Glycol 4000溶于100ml Solution A充分溶解，需要现用现配)，轻轻混匀。
9)30℃培养30分钟后，42℃培养15分钟。
10)室温放置10分钟。
11)5,000 rpm离心1分钟，用5ml YPD培养基悬浮沉淀。
12)30℃培养6小时~过夜。
13)5000～10000 rpm离心，用1～10ml 0.9% NaCl悬浮沉淀。
14)在YPD选择培养基平板(含有一定浓度的AbA，依菌株类型而定)上接种100 µl细胞悬液。30℃培养3-4天后转化完成。
15)挑取阳性转化子，和/或测定转化效率(以每微克质粒DNA转化的菌落数来表示)。

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