鼠尾胶原包被6孔板

正常大鼠唾液腺上皮细胞的培养

鼠尾胶原溶液放入冰浴中的青霉素小瓶，加入0.5ml的10×DMEM培养基。混匀后，再加入浓度为0.34 mol/L的NaOH 0.1ml快速混合（鼠尾胶原液的配制比例，按鼠尾胶原液与10×DMEM及0.34 mol/L NaOH三者的体积比为8:1:1配制），并立即加到24孔培养板中（每孔0.8ml），于37℃下放置30min； 5. 将配好的鼠尾胶原溶液涂布在预先灭菌处理过的盖玻片上，使其凝固； 6. 将鼠尾胶原包被的盖玻片放入24孔培养板内，用D-Hanks液平衡1h，备用；

鼠肝细胞原代培养实验方法

/min，待肝脏膨胀后迅速剪断下腔静脉, 灌流15min； c. 前灌流液灌流完后，立即灌流后灌流液T2（37℃下预热），流速3ml/min，5-10min； d. 取下肝脏，置于平皿中，冰上剪碎肝组织，200目滤网过滤；用基础培养基清洗网上组织； e. 收集滤液，600rpm 离心2min；重复一次； f. 弃上清，往沉淀中加2ml完全培养基，重悬细胞后，台盼蓝染色计数，将细胞接种至鼠尾胶原包被的25cm2培养瓶中，37℃ 5%CO2培养箱中培

为啥你的细胞这么矫情？不愿贴壁呢？

本身状态不好，已经老化，失去贴附性。接种细胞数目太少，无法分泌足够的细胞外基质。复苏时处理速度太慢，复苏过程不当。如何促进贴壁效果？1. 适度消化细胞：HepG- 2、A549、Hela、SGC- 7901 几种癌细胞处理时间可适当放长，一般处理 5 - 6 min，C2C12、COS- 7、NIH- 3T3 比较容易脱落，2 min 足矣，P19Cl6 和 293 细胞贴壁不紧，可在 PBS 漂洗后，直接换新鲜培养基打散。2. 最好用塑料瓶培养，如果是玻璃瓶, 那么可以用鼠尾胶原包被一下培养