- ¥1880 - 2880
- 百奥莱博
- JN0007-WHO
- 北京
- 2025年07月16日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
151
- 英文名：
BalbScript Two-Step RT-PCR UltraMix
- 保质期：
一周
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
RT(50次)&PCR(200次)
特别提示：包括两步法RT-PCR试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：两步法RT-PCR试剂盒
英文名称：BalbScript Two-Step RT-PCR UltraMix
产品货号：JN0007
产品规格：RT(50次)&PCR(200次)
本试剂盒基于本公司生产的BalbScript Reverse Transcriptase反转录酶（百奥莱博货号：JN0011）和HotStart Taq DNA聚合酶（百奥莱博货号：JN0023），具有高效的合成能力和高扩增效率。该试剂盒能以动物、植物和微生物的总RNA或mRNA为模板，用2×BalbScript PreMix 1st Strand cDNA Synthesis UltraMix进行反转录，2×HotStart Taq PCR MasterMix进行扩增。本试剂盒含有从RNA反转录至cDNA并以cDNA为模板进行扩增的全部试剂。
产品特点：
1、反转录反应操作简单，通过减少实验步骤降低了污染几率。
2、使用HotStart Taq酶进行扩增，减少非特异性反应。
试剂盒组成：
| 组份 | JN0007-50次 |
| 2×BalbScript PreMix 1st Strand cDNA Synthesis UltraMix | 500ul |
| 2×HotStart Taq PCR MasterMix | 1ml×2支 |
| RNase Free Water | 1ml |
操作方法：
第一链cDNA合成：
1、融化后，将试剂盒中各组分混匀并稍微离心后置于冰上。
2、按顺序加入下面的反应物
| 模板RNA | 总RNA(0.1 ng -5μg) poly(A) mRNA(10 pg) 特异性RNA(0.01 pg) |
| 2×BalbScript PreMix 1st Strand cDNA Synthesis UltraMix | 10μl |
| RNase Free Water | 至20μl |
3、可选优化步骤。如果RNA模板GC含量高或者含有二级结构，可先将RNA模板和RNase Free Water混匀后，65℃孵育5分钟，冰上冷却后再加入其它组分。
4、轻柔混匀后离心，于42℃条件下孵育60分钟。 如果RNA模板中不含poly A结构，可先在25℃条件下孵育5分钟，随后转到42℃条件下孵育60分钟。
5、70℃加热5min终止反应。
反应产物可直接用于PCR反应，如果不立即使用，在-20℃可保存一周左右。如想延长保存时间，建议使用-70℃保存。
第一链cDNA的PCR扩增：
合成的第一链cDNA可直接用于PCR或qPCR。第一链cDNA反应液体积不能超过PCR反应体系的1/10。通常50 μl的PCR反应体系中，第一链cDNA反应液加入2μl。
常用反应体系（20μl）：
| 2×HotStart Taq PCR MasterMix | 10μl |
| 上游引物 | 0.2-1.0μM（终浓度） |
| 下游引物 | 0.2-1.0μM（终浓度） |
| 模板 | 1μl |
| Taq | |
| ddH2O | 至20μl |
储存条件：-20℃
我公司销售的两步法RT-PCR试剂盒北京价格，质量上佳，价格普惠，欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验1. 原理 RT—PCR 是一种将 cDNA 合成与 PCR 技术结合分析基因表达的快速灵敏的方法，主要用于对表达信息进行检测或定量分析, 还可以用来检测基因表达差异而不必构建 cDNA 文库克隆 cDNA。 RT-PCR 的模板可以为总 RNA 或 poly(A) 选择性 RNA 。逆转录反应可以使用逆转录酶，以随机引物、oligo(dT) 或基因特异性的引物（GSP）起始。 在实际应用中，RT—PCR 又常常分为一步法 RT—PCR 和两步法 RT—PCR。 2. 特点 一步
请教real time PCR的RT部分能否使用传统半定量RT-PCR试剂盒的反转录部分？
各位老师： 您们好！偶欲做几个基因的RT-PCR实验。偶先用传统的半定量两步法RT-PCR试剂盒(TaKaRa DRR019A)扩增了几个基因，并用该试剂盒反转录了不少cDNA。但还有2个基因偶打算用real time PCR法来扩增。拟采用TaKaRa DRR041S试剂盒。但是TaKaRa DRR041S试剂盒说明书上写的反转录步骤是使用另外一个单独的RT Reagents (TaKaRa DRR033A)，得到cDNA再用TaKaRa DRR041S试剂盒扩增。但是仅一个RT
中，逆转录酶将 RNA 转化为 cDNA，然后通过 PCR 反应扩增 cDNA，为下游实验提供研究模板，因而逆转录酶是实验成功的关键步骤之一（如下图）。选定的逆转录酶应对所有样本均具有最高效率，即便是难转录 RNA 样本，如降解、抑制剂残留或具有高度二级结构的 RNA 样本。 图. 逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）。RT =逆转录，RTase =逆转录酶 常用的 RT-PCR 方法分为一步法和两步法，每种方法都各有优缺点，简要概述如下： 表. 对比一步法和两步法 RT-PCR 定量 RT-PCR
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