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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
大量
- 英文名:
2x SYBR qPCR Mix 50ml
- 保质期:
切勿冻存,有效期24个月
- 供应商:
上海泽叶生物科技有限公司
- 保存条件:
长时间储存于4℃
- 规格:
50ml
产品介绍:
本产品基于SYBR Green I 染料嵌合荧光法用于定量PCR (qPCR)检测。本产品基于热启动的Taq DNA Polymerase,高度优化的二价阳离子缓冲液,有效抑制非特异扩增,显著提高扩增效率,从而使qPCR 反应具有更高灵敏度。本产品中含有qPCR 反应检测用的最适浓度SYBR Green I,是一种2x 预混合试剂,操作便捷。使用本产品进行qPCR 反应,可对靶基因以及特异PCR 扩增产物进行准确定量的检测。该产品重复性好,灵敏度高。产品经严格测试,无大肠杆菌残留DNA,扩增基线平稳。本品含 Taq DNA 聚合酶突变体,dNTP ,Mg2+,SYBR Green I等。可配送ROX 校正染料,请根据机型索取.
本产品利用Taq DNA Polymerase 进行PCR,通过检测反应液中SYBR Green I 的荧光强度,达到监控PCR 产物扩增量的目的。
通过PCR 以微量DNA 作为模板,通过热变性、引物退火、DNA 聚合酶作用下引物的延伸生成双链DNA,并在短时间内扩增DNA 达百万倍以上。反应液中的SYBR Green I 可与双链DNA 结合发出荧光,通过检测PCR 反应液中的荧光信号强度,可以对目的基因进行准确定量,同时还可以测定扩增的目的DNA 片段的融解温度。
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文献和实验几个复孔,选择重复性好的 CT 值参与计算。 (2)CT<30,重复性较差。这种情况一般同操作有关。 解决办法:从以下几个方面进行问题的排查:①加样准确度;②移液器吸取液体的准确度;③定期校准 qPCR 仪。 ①加样准确度 避免小体积加样,减少加样误差。可以将引物、SYBR Green Mix、ddH2O 配置成混合体系,并且增加模板的稀释梯度,大体积加样。如:原液 cDNA 添加 1μl,可以更改为原液 cDNA 稀释 5 倍,添加 5μl,使用 ddH2O 补齐体系至 20μl 即可
PCR产物的荧光值就可以。参比染料的作用是标准化荧光定量反应中的非PCR震荡,校正加样误差或者是孔与孔之间的误差,提供一个稳定的基线。现在很多公司已经把ROXTM配制在MasterMix或者Premixture里。如果反应曲线良好或已经优化好反应体系,也可以不加ROXTM染料校正。通常来讲,real-time qPCR的反应程序不需要像常规的PCR那样,要变性、退火、延伸3步。由于其产物长度在80-150bp 之间,所以只需要变性和退火就可以了。SYBR@Green等染料法,最好在PCR扩增程序结束
成功做完了逆转录,这时候可能有些疲累了。筛引物、做定量的时候要加样的孔也较多,即使使用了 qPCR 预混液,也有加错样的可能发生。诺唯赞的 ChamQTM SYBR® Color qPCR Master Mix 系列(Q411 /Q421 /Q431 /Q441)提供不同颜色的试剂,利用移液过程中的变色效应,追踪移液过程,可以极大的减少移液错误。 引物设计有原则 在使用 SYBR 染料法时,引物设计需遵循以下原则:引物长度 18~25bp,产物长度 80~300bp,GC 含量 40~60
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