蛋白酶K 100mg

蛋白酶K 100mg
产品介绍：
Proteinase K(蛋白酶K）是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶，用于生物样品中蛋白质的一般降解。从林伯氏白色念球菌 (tritirachium album limber) 中纯化得到，是以丝氨酸为活性中心的蛋白分解酶，分解蛋白质的活性较强。具有广泛的底物特异性，特别优先分解与疏水氨基酸，含硫氨基酸，芳香族氨基酸的C末端邻接的酯键和肽键。本品在Ca2+盐的溶液中活性稳定，并且在SDS或尿素等蛋白质变性剂存在下活性升高。并在较广的PH范围内（PH4-12.5）均有活性。在组织或细胞核酸分离时，使核酸酶（RNA和DNA）以及反应中其他酶失活。该酶有两个ca2+结合位点，它们离酶的活性中心有一定距离，与催化机理并无直接关系。然而，如果从该酶中除去ca2+，由于出现远程的结构变化，催化活性将丧失80%左右，但其剩余活性通常已足以降解在一般情况下污染酸制品的蛋白质。所以，蛋白酶k消化过程中通常加入edta（以抑制依赖于mg2+的核酸酶的作用）。但是，如果要消化对蛋白酶k具有较强耐性的蛋白，如角蛋白一类，则可能需要使用含有1mmol/l ca2+而不含edta的缓冲液。在消化完毕后、纯化核酸前要加入EGTA（ph8.0）至终浓度为2mmol/l,以鳌合ca2+。

活力：40mAnsom u/mg

工作浓度：50—100μg/ml。
性状：粉末

用途：生化研究。广谱蛋白酶，95C加热10分钟，则完全失活。可替代DEPC处理RNA抽提用的离心管和枪头，实现灭活RNase A的目的，也用于处理RNase-Free的水。充分降解组织或细胞中蛋白质分子特别是核酸，以达到释放和萃取高质量核酸的辅助试剂。用于质粒或基因组DNA、RNA的分离以及蛋白多肽印迹实验推荐反应缓冲液：50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2 。

蛋白酶K配制标准：20mg/ml蛋白酶K配制标准（proteinase K）：将200mg的蛋白酶K加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

注意事项：蛋白酶K在原位杂交技术中通常用于杂交前的处理,它具有消化包围靶DNA蛋白质的作用,以增加探针与靶核酸结合的机会,提高杂交信号.但蛋白酶K的浓度过高、消化时间过长或孵育温度过高时,都会对细胞的结构有一定的破坏,导致组织切片的脱落,细胞核的消失,从而影响杂交结果.EDTA缓冲液可以替代蛋白酶K的作用,解决上述出现的问题,并能达到理想的染色效果.
孵育温度为55至65℃，理想孵育温度为58℃，孵育时间为15分钟至48小时；理想孵育时间为2小时。