一步法microRNA反转录试剂盒报价

特别提示：包括一步法microRNA反转录试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：一步法microRNA反转录试剂盒
英文名称：One Step microRNA cDNA Synthesis Kit
产品货号：MT0005
产品规格：25T|100T

由于miRNA(microRNA)分子序列较小，仅20nt左右，没有真核生物特有的Poly(A)尾巴结构，采用传统Oligo dT引物和随机引物很难获得从miRNA到cDNA的反转录产物。目前普遍采用的解决方案有两种：特异性反转录引物（下图A所示）、两步加A法反转录方案（下图B所示）。Biorab公司开发出一套全新的一步法miRNA反转录试剂盒，可以对成熟的miRNA同时完成Poly(A)反应和反转录反应，直接获得含有特异性tag和15(T)的cDNA产物（下图C所示）。该方法使得miRNA反转录与mRNA的反转录一样轻松，直接将提取的microRNA与反应缓冲液混合物混合并置于PCR仪上1小时即可获得高浓度的、包含所有miRNA分子的cDNA产物，获得的cDNA产物适合于采用SYBR Green染料法进行RealTime PCR进行定量检测。



产品组成：

组分	MT0005A(25T)	MT0005B(100T)
4×One step miRNA RT Solution	125μl	500μl
10×miRNA RT Primer	50μl	200μl
RNase Free H2O	1ml	1ml×2

储存：请置于-20℃，可保存2年，避免反复冻融。
注：如4×One step miRNA RT Solution出现沉淀属正常现象，可用手捂化，混合均匀后使用不影响实验结果。

特别说明：10×miRNA RT Primer引物为5"-CAGGTCCAGTTTTTTTTTTTTTTTVN-3"，定量扩增用特异性上下游引物进行扩增，下图2是以hsa-miR-21为实例说明特异性上下游引物的设计方法（Biorab的microRNA荧光定量PCR试剂盒提供所有miRNA检测，货号：MTAXXXXX，所有引物均经过设计优化，详细请于引物列表中查询。如果您研究的miRNA分子不在列表中，请来信咨询，我们将及时给您优化设计）。

图1：技术原理图：


图2：hsa-miR-21实例设计原理：


操作方法：

1．按以下组分配制反转录反应液：

模板	miRNA	0.01-0.1μg
	Total RNA	0.1-2μg
4×One step miRNA RT Solution		5μl
10×miRNA RT Primer		2μl
Rnase-Free H2O		Up to 20μl

2.在PCR仪上按以下条件进行反应：
  37℃——————60min
  95℃——————5分钟
3．获得cDNA产物后使用microRNA荧光定量PCR试剂盒进行miRNA定量检测。使用该试剂盒反转录所得cDNA产物包含了样品中所有miRNA反转录产物，可用于多个基因的检测分析，可使用内参基因进行定量矫正。内参基因可选择使用RNU6B miRNA荧光定量PCR试剂盒(货号：MTA01501)，适用于来源于人和鼠等哺乳动物的样品；RNU44 miRNA荧光定量PCR试剂盒(货号：MTA01502)、RNU48 miRNA荧光定量PCR试剂盒(货号：MTA01503)，适用于来源于人的样品；SnoRNA135 miRNA荧光定量PCR试剂盒(货号：MTA01504)、SnoRNA202 miRNA荧光定量PCR试剂盒(货号：MTA01505)适用于来源于鼠的样品。Biorab提供的内参扩增引物浓度均为10μM，每20μl反应体系中加入0.4-0.8μl。

我公司销售的一步法microRNA反转录试剂盒报价，一步法miRNA反转录试剂盒质量上佳，价格普惠，欢迎广大新老客户踊跃订购。