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- 百奥莱博
- YT976-HNB
- 北京
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
335
- 英文名：
pET-N-His-TEV Plasmid
- 保质期：
长期
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
阴凉干燥
- 规格：
1μg|100μg
特别提示：包括pET-N-His-TEV质粒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：pET-N-His-TEV质粒
英文名称：pET-N-His-TEV Plasmid
产品货号：YT976
产品规格：1μg|100μg
pET-N-His-TEV是一种用于表达N端含有His标签(His tag)的原核表达质粒。本质粒N端His标签后含有TEV酶切位点，可通过TEV Protease(货号：YT984)切除N端的His标签。本质粒为卡那霉素抗性。
本质粒含有T7启动子/lac操纵子，可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白表达。在多克隆位点的前面，带有一个His标签的编码序列，含有6个组氨酸(6X His)。因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达N端含有His标签的目的蛋白。
本载体在N端His标签与多克隆位点之间含有TEV蛋白酶(TEV Protease)识别的七肽序列ENLYFQG，对应的核酸序列为GAGAACCTGTACTTCCAAGGG，因此可在目的蛋白纯化后用TEV蛋白酶切除N端His标签。TEV蛋白酶酶切发生在七肽序列的Q和G之间，因此在酶切去除His标签的时候目的蛋白的N端会留下一个额外的氨基酸残基G。
通常可以采用如GoldBalb His-tag Purification Resin(货号：YT616)或His标签蛋白纯化试剂盒(货号：YT046)等纯化本质粒表达的目的蛋白，也可以使用His-tag抗体(货号：YT789)检测和少量地分离纯化目的蛋白。
pET-N-His-TEV质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| 1 origin | 12-467 |
| Kanamycin resistance ORF | 563-1645 |
| PBR 322 origin | 2084 |
| LacI coding sequence | 3518-4597 |
| T7 promoter | 4988-5004 |
| His tag coding sequence | 5079-5096 |
| TEV Protease recogniton site sequence | 5097-5117 |
| Multiple cloning site(BamHI-XhoI) | 5118-5165 |
| T7 Terminator | 5251-5297 |
pET-N-His-TEV质粒(5304bp)的图谱如下：
pET-N-His-TEV质粒中推荐使用的测序引物序列如下：
T7 primer(4988-5004):5′-TAATACGACTCACTATA-3′
pET-R primer(5218-5237):5′-TGCTAGTTATTGCTCAGCGG-3′
使用说明：
1．首次使用1μg包装的本产品时，请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2．100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl，共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
3．pET-N-His-TEV质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因，构建的质粒可以用常规方法转入表达菌株。
我公司销售的pET-N-His-TEV质粒价格，pET-N-His-TEV载体质量上佳，价格普惠，欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验strep-tag 对 Strep-Tactin XT的亲和力，大规模纯化 CB2 蛋白；然后通过 WB 检测 MBP-CB2 的表达情况，G 蛋白激活实验检测 CB2 的功能活性。 3、CB2 蛋白的纯化的策略：根据不同构建载体表达的情况及 Strep-Tactin 亲和力的测试，作者通过串联亲和层析对 CB2 蛋白进行纯化，分别使用 C 端 His10 和 N 端 twin-Strep-tag。首先使用 Ni-resin 进行第一步纯化后，再从含有 CB2 蛋白的粗提物进行透析，用 TEV 蛋白
后的目标蛋白产量范围在1.5-100mg/L。趋化因子和细胞因子可以得到高达30-100mg/L的产量。其它关于这些蛋白表达和纯化的有参考价值信息包括： ■ 植物磷酸烯醇式丙酮酸—羧化酶激酶（Ermolova 2003）——目标蛋白切除标签后用BDA（蓝色葡聚糖）亲和层析树脂纯化。纯化后蛋白的催化活性比未切除标签的融合蛋白高50倍。 ■ Xklp3a，Tep3Ag和E8R（De Marco 2004）——用蛋白酶切割后，His-融合的TEV和NusA被Ni2+离子亲和色谱选择性去除
Protein Expression and Purification of RPA70-AB (181-422)
Comments: pSV281 RPA70AB Constructed by L.Mizoue; May '02.This plasmid encodes RPA 70 subunit residues 181-422 as a fusion protein with an NT 6His tag.The tag can be cleaved off with TEV protease (recognition site is ENLFYQG)leaving "GS" at NT
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