riboEDIT Cas9 Protein, S.pyoge

riboEDIT Cas9 Protein是riboEDIT CRISPR-Cas9的RNP体系的重要组成部分，RNP体系包括了crRNA和tracrRNA和Cas9蛋白，tracrRNA可实现大规模合成，靶向DNA目的序列的crRNA可以高通量合成，Cas9蛋白为热稳定S.pyogenes来源的核酸酶（又称为spCas9）。此RNP体系不需要自行构建gRNA表达载体，无需在病毒级实验室中操作，无DNA组分，并且可实现多个crRNA指导下的多靶点编辑，大大简化前期实验步骤。该即用型的RNP体系适合化学转染（借助蛋白转染试剂）、显微注射或电转（电穿孔）进行基因编辑。500pmol的Cas9蛋白相当于83ug，一般情况下每孔转染1-2ug的Cas9蛋白，可转染超过40次以上。

应用举例：riboEDIT™ CRISPR-Cas9 mRNA与RNP体系高效基因编辑效率

riboEDIT™ Cas9 Expression mRNA具有高效的基因组剪切效率
 

图1. MHCC97H细胞共转染10pmol riboEDIT™ crRNA、10pmol riboEDIT™ tracrRNA和1ug riboEDIT™ Cas9 mRNA，48小时后 riboEDIT™ T7EI Enzyme酶切检测靶位点的剪切效率，候选7个靶基因的剪切条带及编辑效率。如图所示，#1#2表示同一基因不同位点设计的2条crRNA。

riboEDIT Cas9 RNP具有高效的基因组剪切效率
 

图2. MHCC97H细胞共转染6pmol riboEDIT™ crRNA、6pmol riboEDIT™ tracrRNA和6pmol riboEDIT™ Cas9 Protein，48小时后 riboEDIT™ T7EI Enzyme酶切检测靶位点的剪切效率，候选7个靶基因的剪切条带及编辑效率。如图所示，#1#2表示同一基因不同位点设计的2条crRNA。
 

图3.  riboEDIT™ CRISPR-Cas9 mRNA基因编辑体系与riboEDIT Cas9 RNP复合物具有等同的靶位点剪切活性。

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