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大量
- 英文名:
MolPure® Endo-free Plasmid Maxi Kit
- 保质期:
有效期1年
- 供应商:
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 保存条件:
-20℃保存
- 规格:
10T
MolPure® Endo-free Plasmid Maxi Kit适用于从150-300 ml大肠杆菌LB培养液中快速提取0.5-2 mg纯净的高拷贝质粒DNA,提取率高达80-90%,具有高效、快速、方便等特点。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,配合本公司独特的裂解液配方可以最大限度的回收高纯度DNA。提取的DNA纯度高,内毒素残留极低(<0.1 EU/μg DNA),细胞转染效果很好,也可直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。
稳定性好:离心吸附柱内硅基质膜全部采用特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。
快速、方便:30 min从150-300 ml大肠杆菌LB((Luria-Bertani)培养液中,快速提取0.5-2 mg纯净的高拷贝质粒DNA,提取率达80-90%。
纯净:独特工艺配方清除内毒素,内毒素含量极低(<0.1 EU/μg DNA),细胞转染效果很好。
取150 ml菌液,使用19036和T品牌同类产品提取质粒DNA,1 ml ddH2O洗脱。鉴定条带亮度和内毒素残留检测。结果表明:19036提取产物产量高、内毒素残留低于0.1 EU/μg DNA。

图1.琼脂糖电泳判定提取的2.6 kb、40 kb及5.7 kb质粒产量

图2.内毒素含量测定
Part I组分-15~-25℃保存;Part II组分2~8℃保存;Part III组分室温保存。有效期2年。
Q:提取性能和效果如何?
A:提取体积大,产量高:150~300 mL,0.5~2 mg,提取率高达 80-90%,内毒素含量极低(<0.1 EU/
μg DNA),细胞转染效果很好。
Q:加入去内毒素溶液ER 后冰浴不澄清怎么办?
A:冰浴 5 min,冰浴过程中,颠倒混匀 2-3 次至溶液变清亮透明(或稍有浑浊),不澄清可能跟菌的
种类和状态有关系。
Q:如何检测产物内毒素去除情况?
A:推荐我们的产品(60401)动态浊度法内毒素检测鲎试剂
Q: 内毒素清除离心后分层不彻底?
A: 提升离心温度;加大离心转速;增加离心时间。
Q:加入内毒素液 ER后,离心上清仍然是蓝色的,是否正常?
A:并于时间加大转速,增加离心时间,确实上层还是一点点蓝色问题不大,只要分层了就行,下面是内毒素清除剂分层,上面是水相层,有点蓝色没问题,后面还有多次纯化步骤可以去除的。
Q: 提取的产量低
A: 中低拷贝质粒:长片段、表达型载体常以低拷贝为主,建议加大菌体使用量,菌液过夜培养
菌种问题:菌种保存中质粒丢失,养菌前先划线活化,稳定产量
菌体未充分裂解:在buffer种充分重悬,避免成团
试剂准备有误:有沉淀析出的溶液需要加热;加入的乙醇体积不准
洗脱不充分:洗脱液预热,二次洗脱
Q: 有基因组污染
A: 培养时间太长:培养时间建议控制在12-16h;裂解不充分。
Q: 下游结果不理想
A: 盐离子污染;乙醇污染;质粒降解;层析柱膜脱落。
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文献和实验E.Z.N.A.® Endo-free Plasmid Mini Kit I Spin Protocol
strain of E.coli be used for routine plasmid isolation. Examples of such strains include DH5"® and JM109®. 2. Pellet 1.5-5 ml bacteria in appropriate vessels by centrifugation at 10,000 × g for 1 min at room temperature. 3. Decant or aspirate
E.Z.N.A. Endo-Free Plasmid Mini Kit II Spin Protocol
ethanol (room temperature, 96-100%). Gently mix by inverting tube 6-7 times and incubate at room temperature for1-2 minutes. Plasmid DNA Purification with the HiBind® DNA Mini Column II: 8. Equilibrate the HiBind® DNA column: Add 100ul
Fastfilter Plasmid Maxi Kit Spin Protocol
. All of centrifugation steps must be carried out at room temperature. Purify Plasmid DNA with HiBindTM DNA Maxi Column: 10. Transfer 16 ml of the cleared lysate to the HiBind® DNA maxi column assembled in the 50 ml collection tube. The Maxi column
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