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- 询价记录
- 技术资料
- 供应商：
河南羽朵医疗科技有限公司
- 库存：
1000
- 注册证号：
粤械注准20192400701
- 国食药监械注册号：
粤食药监械生产许20091794号
- 英文名：
DNA
- 保质期：
2年
- 保存条件：
2-8度
- 规格：
40T
【产品名称】精子DNA 碎片检测试剂盒使用说明书（精子染色质扩散法）
通用名称：精子DNA 碎片检测试剂盒（精子染色质扩散法）
英文名称：Kit for determination of the DNA fragmentation level in spermatozoa
【包装规格】
40 次测试/盒
【预期用途】 本试剂盒主要用于成年男性精子DNA 完整程度的检测。
【检验原理】
精子染色质扩散法（Sperm Chromatin Dispersion，SCD)。DNA完整的精子在经过变性和去掉核蛋白后DNA 扩散形成特征性的光晕, 而存在DNA 碎片的精子不会产生这种特征性的光晕。根据光晕的有无和大小判断精子的DNA完整程度。
【主要组成成分】
【储存条件及有效期】
【适用仪器】
2）－20℃冷柜 5）低速离心机
3）37℃恒温水浴箱
2）1μl-5μl 数字可调移液枪和一次性吸头 8）一次性使用手套
3）20μl-200μl 数字可调移液枪和一次性吸头 9）纯化水
4）100μl-1000μl 数字可调移液枪和一次性吸头 10）液化剂
5）镊子或止血钳 11）70%、90%和 100%乙醇溶液
6）反应池
英文名称：Kit for determination of the DNA fragmentation level in spermatozoa
【包装规格】
40 次测试/盒
【预期用途】 本试剂盒主要用于成年男性精子DNA 完整程度的检测。
【检验原理】
精子染色质扩散法（Sperm Chromatin Dispersion，SCD)。DNA完整的精子在经过变性和去掉核蛋白后DNA 扩散形成特征性的光晕, 而存在DNA 碎片的精子不会产生这种特征性的光晕。根据光晕的有无和大小判断精子的DNA完整程度。
【主要组成成分】
| 包被载玻片 | 2 盒 | 40 孔（20 孔/盒） | 包被有 1%低熔点琼脂糖的载玻片 |
| 易熔凝胶 | 40 瓶 | 5.6ml（0.14ml/瓶） | 0.5%琼脂糖溶液 |
| 反应液A | 1 瓶 | 100ml | 含 0.09%过氧化氢的醋*酸溶液 |
| 反应液B | 1 瓶 | 100ml | 含 0.5%十二烷基硫酸钠（SDS）的Tris-HCl 缓冲液 |
| 瑞氏染液 | 1 瓶 | 20ml | 含 0.2%瑞氏色素、0.06%吉氏色素的甲醇溶液 |
| 瑞氏缓冲液 | 1 瓶 | 30ml | pH 值 6.4～6.8，0.06mol/L 磷酸盐缓冲液 |
| SCD 保存液 | 1 瓶 | 15ml | 0.72%氯化钠、65%吐温 20 溶液 |
| 盖玻片 | 1 盒 | 45 片 |
【储存条件及有效期】
- 储存条件
- 试剂盒需避光放 2－8℃环境保存。
- 包被载玻片可在室温环境下保存，须注意防潮。
- 有效期：试剂盒放 2－8℃环境内保存，使用有效期为 2 年，开封后 2－8℃保存可用 58 天。
【适用仪器】
- 本试剂盒适用仪器：光学显微镜
- 操作过程中用到的其他设备：
2）－20℃冷柜 5）低速离心机
3）37℃恒温水浴箱
- 其他需要但未提供的材料
2）1μl-5μl 数字可调移液枪和一次性吸头 8）一次性使用手套
3）20μl-200μl 数字可调移液枪和一次性吸头 9）纯化水
4）100μl-1000μl 数字可调移液枪和一次性吸头 10）液化剂
5）镊子或止血钳 11）70%、90%和 100%乙醇溶液
6）反应池
【样本要求】
- 受试者须禁欲 2-7 天，通过手淫法或戴特制的采集套性交方法留取全部精液标本。
- 新鲜精液标本液化后进行检测，或者加入SCD 保存液后置-20℃保存待检。
【检验方法】
- 试剂及室温准备
1）将易熔凝胶管置于 80℃孵育 20 分钟，待完全融化后，将易熔凝胶管置于 37℃待用（从 80℃转移至 37℃需要至少平衡 5min 后方可使用）。
2）检测前将室温调整至 20~28℃左右。
- 标本准备
- 以生理盐水调整液化的新鲜精子（或液氮冻存的精子或经提取后的活动精子）浓度至 5-10×106/ml。
- 不能完成检测的新鲜标本，需要加入 3 倍体积的 SCD 保存液后再冷冻保存（可至少保存 15 天）。方法如下：在Eppendorf 管中加入SCD 保存液 300μl 和待保存精液 100μl，充．分．混．匀．（很重要），置于-20℃或-80℃保存。检测时，将其室温平衡后，计数精子浓度，以生理盐水调整精子浓度至5-10×106/ml。
注意：精液标本体积（100μl）:SCD 保存液体积（300μl）＝1:3，不可随意加大（但可以减少）精液标本所占的体积比。
- 检测方法
- 取精子浓度 5-10×106/ml 的待测标本 60μl，加入已熔化的易熔凝胶管（注意 37℃持续保温），充分混匀，37℃孵育待用。
- 将包被载玻片置于 2~8℃冰箱预冷 5min 后取出，迅．速．于载玻片包被区域加入步骤 1 制备的精子悬液 30μl。
- 迅．速．（非常重要）盖上盖片（勿对盖片施压），尽量避免产生气泡；置 2~8℃冰箱 5min，使其凝固。
- 从冰箱中取出载玻片，小心移去覆盖在上面的盖片。方法：如图 1 所示，沿盖片下端向前轻轻推动盖片，直至盖片另一端稍稍超出载玻片宽度；捏住盖片的突出端，沿载玻片平面轻轻地抽走盖片（图 2）。注意：在移动盖片的过程中，盖片始终紧贴于载玻片平面滑动，切不可将盖片向上抬离凝胶平面。
- 将载玻片立即垂直浸入盛有反应液A 的反应池内，20~28℃准确反应 7min。
- 取出载玻片，用滤纸吸去残存于载玻片背面及侧缘的液体（勿接触标本区）；将载玻片垂直浸入盛有反应液B 的反应池内，20~28℃准确反应 25min。
- 取出载玻片，用滤纸吸去残存于载玻片背面及侧缘的液体（勿接触标本区）；将载玻片水平浸入大量的纯化水中 5 分钟，其间换水 1~2 次。
- 取出载玻片，用滤纸吸去残存于载玻片背面及侧缘的液体（勿接触标本区）；将载玻片垂直浸入盛有 70%乙醇的反应池内，2min。
- 取出载玻片，用滤纸吸去残存于载玻片背面及侧缘的液体（勿接触标本区）；将载玻片垂直浸入盛有 90%乙醇的反应池内，2min。
- 取出载玻片，用滤纸吸去残存于载玻片背面及侧缘的液体（勿接触标本区）；将载玻片垂直浸入盛有 100%乙醇的反应池内，2min；
- 空气中自然干燥。
- 染片。每张载玻片以瑞氏染液 15~20 滴覆盖，稍等片刻再缓慢地加入瑞氏缓冲液 30-40 滴，以洗耳球轻轻吹打混合染液（注意勿破坏染液形成的表面张力），室温 15min 后以流水轻轻冲洗染片。
- 自然干燥或吹干。
- 高倍显微镜下观察 500 个精子，计数存在DNA 碎片的精子数量。
- 结果观察与计算：
- 精子 DNA 碎片判定标准：精子头部仅产生较小的光晕或无光晕，单侧光晕的厚度不超过精子头部最小直径的 1/3。示意图如下（图 3）：
图 3
（图 3 中Œ为精子 DNA 碎片判定图示，其中 A 为精子头部最小直径，B 为单侧光晕厚度，当B≤ 1 A
3
则表明精子存在DNA 碎片；Ž为DNA 完整的精子，为存在DNA 碎片的精子）
- 精子DNA 碎片率（%）＝存在DNA 碎片精子数÷被观察精子总数×100% 精子DNA 完整率（%）＝1－精子DNA 碎片率（%）
精子DNA 完整率＝1－15%＝85%
【参考区间】
*正常参考值：精子DNA 碎片率：<25%
*：目前学术界尚无统一的参考标准。综合分析多篇 SCD 相关文献资料[1-5]显示，98 例正常生育男性未经分离提取的原始精子，其 DNA 碎片率为 12.31±6.31(~25%)。
【检验结果的解释】
标本保存不当可导致精子DNA 碎片率增高（假阳性）；延长反应液 A 或反应液B 的反应时间可导致精子DNA 碎片率降低（假阴性）。
同一批检测标本，所有精子均出现光晕或均无光晕产生，应高度怀疑检测结果不可靠，查找原因后重新检测，并平行测定质控品。
【检验方法的局限性】
需要人工操作，难以实现自动化批量检测。
【产品性能指标】
【注意事项】
-
- 批内精密度：变异系数（CV）≤8% 2. 批间精密度：变异系数（CV）≤10%
【注意事项】
- SCD 保存液可在一定时间内维持精子 DNA 碎片的稳定性。加入的标本量不应超过总体积（精液标本体积+SCD 保存液体积）的 1/4；标本在置于-20℃保存前，务必确保标本已与保存管中的 SCD 保存液充分混匀。
- 将检测室温控制在 20~28℃是必要的，以保证反应体系的可靠性与稳定性。
- 使用中注意防止试剂挥发和过度携带污染，反应液 A、反应液 B 可反复使用 3~5 次；70%、90% 和 100%乙醇可反复使用 3 次。已使用过的试剂不要与未使用过的试剂混合，反复使用几次后再更换新的试剂。可将盛有试剂的反应池（选购）加盖后直接置 2~8℃保存，使用前平衡至室温即可。
- 精液中的各类圆型细胞在经过变性等过程后，形态结构会发生较大改变，很容易与失去尾部结构的精子相混淆。因此在计数精子过程中，如果发现细胞胞体很大且无精子尾部特征，则不要将其计入精子之列。
- 若片中精子光晕均较小且颜色较淡，则可能是因为瑞氏染色不充分或瑞氏染液失效所致，可酌情复染；若片中精子头部与光晕均深染分界不清，则是因为瑞氏染色过度所致，可酌情脱色。
- 反应液B 有一定的刺激性气味，操作过程中注意加强隔离防护。若不慎接触到皮肤或溅入眼睛， 马上以大量清水或生理盐水冲洗并寻求医治。
- 受检者所有样品均应视为潜在的传染源，检测完毕的样本、试剂均须做为医疗废物处理，避免污染环境。
- 精子 DNA 碎片检测试剂盒为体外诊断试剂，检测结果仅供临床参考，对患者的临床管理应结合其症状/体征、病史、其它实验室检查及治疗反应等情况结合考虑。
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