- ¥1280
- 汉恒生物
- Code#HB-SLR-100
- 中国
- 2025年07月12日
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- 技术资料
- 英文名：
HBLumi Luciferase（Firefly） Reporter Assay kit
- 供应商：
汉恒生物
- 保存条件：
-20℃
单萤光素酶检测试剂盒
实验原理
萤火虫荧光素酶（firefly luciferase, fluc）能催化荧光素（luciferin）产生生物荧光反应，反应过程如下图所示。
1.底物存在时，催化底物发出萤光
2.萤光亮度和萤光素酶的量成正比
应用
转录因子结合位点与启动子活性分析
转录因子（Transcription factors，TF）是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子，也称为反式作用因子，转录因子仅与其靶启动子中的特异顺序结合，从而增强其下游基因的表达。
荧光素酶报告基因实验是检测这类转录因子及其靶启动子中特异序列结合的重要手段
产品规格
Luciferase (firefly) Reporter Assay Kit (100 rxns)
_______________________________________________________________________________
Luciferase Reaction Buffer 10 ml
Luciferase Reaction Substrate (Lyophilized) 1 vial
实验步骤
一、配制试剂
1.1 Lysis Buffer：Lysis Buffer (5X) 用水稀释5倍，配制成工作液；
1.2. Luciferase Reaction Reagent：用Luciferase Reaction Buffer（5 ml）溶解Luciferase Reaction Substrate干粉，混匀后分装、避光保存，避免反复冻融。
二、裂解细胞
2.1 细胞裂解时密度应小于95%，细胞生长过密，易导致裂解不充分；质粒瞬转、病毒感染细胞后，需培养一段时间（一般48小时），使荧光素酶充分表达；调节实验参数，以满足上述条件；
2.2 去除培养基，用PBS润洗一遍，注意不要将细胞吹起；加入适量的Lysis Buffer。
2.3 将细胞培养板置于摇床上，室温、轻晃孵育15分钟；
2.4 将裂解物转移到新的EP管中，4oC、12,000rpm离心1分钟，取上清备用
三、荧光检测
取20μl裂解物，加入100μl平衡至室温的Luciferase Reaction Reagent，混匀后于酶标仪中检测fLuc信号。
汉恒萤光素酶（firefly）检测试剂盒具有操作简单、检测快捷、灵敏度高等优点，是科研工作的优质工具！
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文献和实验示例： Jurkat细胞用1μM喜树碱(Camptothecin) (左)或未加药 (右)处理4h，FITC-Annexin V/PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒染色后，流式细胞仪荧光检测。 Annexin V-FITC单阳性细胞为早期凋亡细胞，Annexin V-FITC和PI染色双阳性的细胞为坏死细胞或者晚期凋亡。PI单染色阳性位裸核细胞。 实测数据可能会因细胞类型、细胞凋亡情况，检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。 流式检测细胞凋亡的数据分析方法： 1） 选中所有颗粒，将FSC
., 2010)，是 DNA 双链断裂后最早发生的事件之一。目前对 H2B 磷酸化的研究还不够深入，但发现 H2B 磷酸化可促进凋亡相关的染色质浓缩、DNA 断裂和细胞死亡 (Füllgrabe et al., 2010)。 泛素化 所有组蛋白核心蛋白都可以被泛素化，但 H2A 和 H2B 是最常见的，也是细胞核中泛素化程度最高的 两种蛋白 (Cao et al., 2012)。组蛋白泛素化在 DNA 损伤反应中起核心作用。 在 DNA 双链断裂位点发现了组蛋白 H2A、H2B 和 H2AX 的单泛素
Q：Annexin V 凋亡检测试剂盒的原理是什么？ A：Annexin V 是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸 PS 有高度亲和力，可通过细胞外侧暴露的 PS 与凋亡早期细胞胞膜结合，将 Annexin V 标记荧光染料如 FITC 利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)或 7-AAD 可与双链 DNA 特异性结合，并产生强烈的荧光，正常情况下无法透过细胞膜。由于凋亡晚期或坏死细胞膜丧失完整性，核染料 PI 或 7-AAD
