双荧光素酶检测试剂盒

产品概述

双荧光素酶报告基因系统是目前生命科学研究中应用最为广泛的基因表达调控研究工具之一。汉恒生物双荧光素酶检测试剂盒（HB-DLR-100）利用萤火虫荧光素酶（Firefly Luciferase，F-Luc）与海肾荧光素酶（Renilla Luciferase，R-Luc）两种报告基因构成双酶检测体系，通过顺序检测两种荧光素酶的相对活性，实现对目的基因转录调控活性的精准定量分析。

该试剂盒操作简单、检测迅速、灵敏度高，已广泛应用于转录因子与启动子互作验证、miRNA靶基因功能研究、lncRNA/circRNA调控机制探究等众多领域。

 

荧光素酶简介

荧光素酶（Luciferase）是自然界中能够产生生物发光反应的酶的总称。在双荧光素酶报告系统中，最常用的两类荧光素酶分别来源于萤火虫（Photinus pyralis）和海肾（Renilla reniformis）：

酶类型	英文名	分子量	催化底物	发光特征
萤火虫荧光素酶	Firefly Luciferase（F-Luc）	61 kDa	D-荧光素（D-Luciferin）	强发光，作为报告基因
海肾荧光素酶	Renilla Luciferase（R-Luc）	36 kDa	腔肠素（Coelenterazine）	稳定发光，作为内参

两种荧光素酶催化底物产生的荧光强度与酶的表达量成正比，可通过光度计/酶标仪精确定量。

实验原理

萤火虫荧光素酶（firefly luciferase, fluc）和海肾荧光素酶（renilla luciferase, rluc）可分别催化荧光素（luciferin）和腔肠素（coelenterazine）产生生物荧光反应，反应过程如下图所示。

在双荧光素酶反应中，首先用Luciferase Reaction Reagent检测fLuc信号；随后，直接加入Luciferase Reaction Reagent II，将fLuc的信号猝灭，同时产生rLuc信号。该方法具有操作简单、检测快捷、灵敏度高等优点。

 

如需查看完整、详细的产品使用说明，欢迎登录汉恒生物官网（www.hanbio.net），在[资源中心]板块获取【试剂说明书】双荧光素酶检测试剂盒。

 

产品特点

特点	描述
操作简便	两步法顺序检测，无需更换样品，操作流程清晰
检测快捷	试剂预处理简单，整体检测耗时短
灵敏度高	可检测弱启动子及低表达水平，灵敏度出色
线性范围宽	定量范围广，适用于不同表达水平的研究体系
兼容性强	适配多种细胞类型和常用报告载体（如 psiCHECK2）

 

试剂盒组成

（100 rxns 规格）

组分名称	规格	说明
Lysis Buffer（5×）	10 mL	5倍浓缩细胞裂解液，使用前稀释至1×
Luciferase Reaction Buffer	10 mL	萤火虫荧光素酶反应缓冲液
Luciferase Reaction Substrate	1管（冻干型）	萤火虫荧光素酶底物（干粉），溶于Buffer后使用
Luciferase Reaction Buffer II	10 mL	海肾荧光素酶反应缓冲液II
Luciferase Reaction Substrate II	80 μL（125× 浓缩液）	海肾荧光素酶底物，稀释后使用

 

主要应用领域

1. miRNA 靶基因验证

将 miRNA 潜在结合位点（约500 bp 的3'UTR区段）克隆至报告载体（如 psiCHECK2）F-Luc 的下游，与 miR mimics 共转染细胞后，通过双荧光素酶活性变化验证 miRNA 与靶基因的结合关系。

2. 转录因子与启动子互作研究

将目标启动子序列克隆至荧光素酶报告载体上游，检测特定转录因子对靶启动子转录活性的激活或抑制作用。

3. lncRNA / circRNA 功能研究

利用"分子海绵"机制，验证 lncRNA 或 circRNA 对 miRNA 的吸附作用，揭示 ceRNA 调控网络。

4. 基因调控元件功能解析

研究增强子、沉默子等调控元件的活性，以及药物或信号通路对基因表达的调控机制。

5. 报告基因定量检测

凡是利用萤火虫-海肾双报告系统进行的蛋白质互作、病毒感染效率、CRISPR 编辑效率等各类定量研究。

相关产品与服务

汉恒生物除提供试剂盒外，还提供完整的双荧光素酶研究解决方案：

产品/服务	说明
荧光素酶（Firefly）检测试剂盒	单荧光素酶报告基因定量检测
双荧光素酶检测服务	全程外包，含载体构建、转染、检测、数据分析
慢病毒/AAV包装服务	可稳定表达报告基因，适合难以瞬转的细胞
miRNA/lncRNA靶基因验证服务	含双荧光素酶验证完整实验方案
转染试剂	多种细胞适用的高效转染试剂