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- 汉恒生物
- HB-DLR-100
- 中国
- 2026年05月29日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名：
HBLumi Dual-Luciferase Reporter Assay kit
- 保质期：
-20℃可保存半年，-80℃可保存一年
- 供应商：
汉恒生物
- 保存条件：
-20℃或-80℃保存
- 规格：
100rnx
萤光素酶（Luciferase） ：是自然界中能够产生生物发光的酶的统称，其中最有代表性的是来自萤火虫体内(Firefly)和海肾(Renilla)体内的两类萤光素酶，荧光素酶可以催化特定的荧光素底物转变成氧萤光素，同时发出强烈的光。
萤火虫萤光素酶（firefly Luciferase，F-Luc）， 61kDa，可催化D-荧光素发出萤光
海肾萤光素酶（Ranilla luciferase，R-Luc）， 36kDa，可催化腔肠素发出萤光
1.底物存在时，催化底物发出萤光
2.萤光亮度和萤光素酶的量成正比
应用
miRNA和靶基因结合双萤光素酶验证方案
miRNA是一类由内源基因编码的长度约为22 个核苷酸的非编码单链RNA分子，通过靶向结合目的基因的结合位点（通常位于基因的3端非编码区——3UTR区），抑制其上游基因的表达。
鉴于miRNA的特点及luc的特性。 miRNA及其靶结合位点的验证可以通过双荧光实验来实现：包括miRNA与其靶点相关分析，miRNA靶基因验证、lncRNA与circRNA 吸附miRNA验证等 
检测原理：
把miR潜在结合构建到报告载体上F-Luciferase下游，将报告载体与 miR的mimics共同转染到细胞内测定荧光素酶值，分析F-Luciferase活性即可反应miRNA与结合位点的结合特性 
检测方法及载体工具：
把miR潜在结合位点上下游~500bp（he/或突变位点）构建到荧光素酶报告载体上psiCHECK2的F-Luciferase下游3UTR区，载体上持续性表达R-Luciferase元件作为内参， 与miR的mimics（小片段双链miRNA ）/ NC共同转染293T细胞共同转染到细胞内测定荧光素酶值，分析F-Luciferase活性即可反应miRNA与结合位点的结合特性 
miRNA及靶点验证F-Luciferase报告载体
产品规格
Dual-Luciferase Reporter Assay Kit (100 rxns)
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Luciferase Reaction Buffer 10 ml
Luciferase Reaction Substrate (Lyophilized) 1 vial
Luciferase Reaction Buffer II 10 ml
Luciferase Reaction Substrate II（125X） 80μL
实验步骤：
一、细胞转染
转染48 h后收集样检测。
二、荧光检测
1. 将培养箱中的24孔板取出，放在室温，至细胞平衡到室温。
2. 加入细胞裂解液Lysis Buffer，充分裂解后12000rpm 4℃离心10min并转移至96孔板中。
3. 每孔加入F-Luc底物试剂，放入酶标仪中测定记录Firefly luciferase值。
4. 每个孔中加入Stop solution终止F-Luc反应并淬灭F-Luc荧光
5. 每孔加入R-Luc底物放入酶标仪中测定记录Renillaluc luciferase值
6. 计算Firefly luciferase相对荧光值F-Luc/ R-Luc
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文献和实验[1] Zhou J, Wang S, Lou J, Pan B, Zhao M, Li Q, Zhou J, Du Y, Ding S, Yu M, Zhou J, Chen X, Jin L, Wang X, Hu Y, Wang Z, Li X, Zheng C, Sun J, Huang Z. FGF4-FGFR1 signaling promotes podocyte survival and glomerular function to ameliorate diabetic kidney disease in male mice. Nat Commun. 2025 Nov 25;16(1):10430.
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1、双荧光素酶实验原理； 2、验证转录因子与启动子互作； 3、验证miRNA与mRNA互作
在用萤火虫荧光素酶定量基因表达时 ，通常采用第二个报告基因来减少实验的变化因素。但传统的共报告基因（比如CAT，β-Gal，GUS）不够便利。因为各自的测试化学，处理要求，检测特点存在差异。Promega提供一种先进的双报告基因技术，结合了萤火虫荧光素酶测试和海洋腔肠荧光素酶测试。双荧光素酶报告基因测试系统，结合pRL载体系统，表达第二个报告基因海洋腔肠荧光素酶，在单管中进行双荧光素酶报告基因测试，快速，灵敏，简便。系统还提供PLB裂解液，用来裂解在多孔板中培养的哺乳细胞，不需操作单个样品
【求助】请教一个关于双荧光素酶报告基因检测系统中共转染两种报告基因质粒的比例的问题？
lsdcfhyj 用双荧光素酶报告基因检测系统进行报告基因检测时需要共转染两种荧光素酶报告基因质粒，但是我不知道两种质粒间的比例是多少，有哪位前辈做过这方面实验的，请帮我指点一下，谢谢了 xxshc 这个比例没有特别的规定。我用的pRL－TK（海蜃素荧光素酶）的荧光值要高一些，我转20ng/孔（24孔板），作为内参.pGL3（萤火虫荧光素酶）的荧光值低一些，我转0.4ug/孔（24孔板）然后0.4ug的调整质粒。这样的话，萤火虫荧光素酶
