WB化学发光法检测试剂盒(人IgG)

中文名称：WB化学发光法检测试剂盒(人IgG)
英文名称：ECL Western Blotting Detection Kit(Human IgG)
产品规格：1kit
发货周期：1～3天
SDS-PAGE电泳后，蛋白质按照分子量大小分离，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）后，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶标记的第二抗体起反应，加入发光底物后，能让胶片感光。经显影和定影后，可以在胶片上显示出条带（抗原所在位置）。
产品内容：
封闭试剂：30g(可配制400ml)。
10倍浓缩抗体稀释液，50ml。
HRP标记二抗，0.3ml，效价1:500～1000。
ECL显色液，25ml A液 + 25ml B液。
保存条件：-20℃避光密闭保存，有效期一年。若经常使用，可将封闭试剂，抗体稀释液和ECL显色液存放于 2-8℃以方便使用。
操作步骤(仅供参考)：
常规电泳转膜后：
1．清洗转印膜：将膜剥离下后，作好标记，一般在左上角剪一缺口。室温用TBS-T漂洗3次每次5min,以尽量洗去转印膜上的SDS，防止影响后面的抗体结合。
2．按5g封闭试剂加100ml双蒸水计，配制膜封闭液，配好的膜封闭液为乳白色悬液，将漂洗过的转印膜放入封闭液内，置摇床孵育，室温封闭30min。用TBS-T缓冲液（pH7.6）洗膜，室温漂洗3次每次5min。
3．将10×抗体稀释液用双蒸水稀释成1×(10ml 10×抗体稀释液加入90ml双蒸水，混匀，可4℃保存三个月)。此稀释液可作为一抗和二抗的稀释液。
4．用1×的抗体稀释液稀释一抗。根据用量以及一抗的推荐稀释浓度来稀释一抗。将杂交膜放入杂交袋中，加入一抗工作液，封口，4℃孵育过夜或37℃摇动孵育2h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。
  注：如果所加一抗不同，可在此步将膜沿电泳方向剪成条，分别作好标记，分开孵育。
5．用TBS-T 缓冲液（PH7.6）洗膜，室温漂洗3次每次5min。
6．用1×的抗体稀释液稀释二抗。根据用量，按10ml抗体稀释液加入15μl HRP标记二抗的比例，配制二抗工作液。将杂交膜放入杂交袋中，加入二抗工作液，封口，37℃摇动孵育1h。此用过的抗体一般可回收第二天
再使用一次。
7．用TBS-T缓冲液（pH7.6）洗膜，室温漂洗3次每次10min。
8．根据用量，取ECL发光液A、B等量混匀，加在膜正面，暗室显色1～5分种。倾去显色液，小心用纸吸去显色液，在上面盖一层平整的透明纸。再取出感光胶片，做好标记，轻轻的放在膜上，显色30秒到1分钟，取出胶片浸入显影液中，观察显色情况，再放入定影液中1分钟。根据条带强弱，再次感光时可减短或者加长感光时间（从5秒到30分钟）以期达到理想结果。
注意事项：
1．请根据一抗来源选择试剂盒。
2．可以根据显色结果来优化实验反应时间。如背景过深，可延长膜封闭时间，加长最终漂洗次数与时间。如果条带过弱，可增加抗体浓度，可延长抗体孵育时间或加长感光时间。
3．TBS-T（0.01M，PH7.6）配制方法：称取NaCl 8.5g，Tris 1.21g，用800ml双蒸水溶解，用盐酸调pH到7.6，再加入0.5ml Tween-20，用双蒸水 加至1000ml，混匀即可。（也可按照自己的配制习惯来配制）使用说明 
    1. 细胞的增殖和细胞毒实验，一般可在96孔细胞培养板中进行。 
    2. 每孔加入100微升细胞悬液。细胞的数量取决于实验目的和培养时间。增殖实验每孔通常加入103个以上数量的细胞；细胞毒性实验每孔至少加入5x103个或以上数量的细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等因素确定）。 
    3. 接种的细胞按照实验需要，送入细胞培养箱进行培养。增殖实验通常要给予0-10微升特定的药物或生长因子进行刺激。细胞毒实验通常要给予0-10微升抑制因子或细胞毒药物； 
    4．培养结束后，每孔加入20微升MTT溶液，在细胞培养箱内继续孵育3－6小时；   
    5．孵育结束后，每孔加入100微升Formanzan溶解液，在37℃细胞培养箱内再继续孵育，直至在镜下观察formazan全部溶解。通常37℃孵育4小时左右，紫色结晶会全部溶解。如果紫色结晶较小较少，溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大较多，溶解的时间会略长。  
    6. 在570nm测定吸光度。如无570nm滤光片， 560-600nm范围的滤光片均可使用。

WB化学发光法检测试剂盒(人IgG) 使用注意事项
1． 微量试剂取用前请离心集液。
2． Annexin V-EGFP，Propidium Iodide（PI）避光保存及使用。
3． Propidium Iodide （PI）有毒，操作时请戴手套。
4． 本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不应低于1×105，，不推荐用于检测组织样本。
5． 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，需用不含EDTA的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA的PBS中，防止进一步的损伤。
6． 细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。
7． 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。
S100A4 polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse; Rat测试范围:IHC包装:100 ul
PCP4 polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse; Rat测试范围:WB; IHC包装:100 ul
UBB polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse; Rat测试范围:WB; IHC包装:100 ul
UPK3B polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:WB; IHC包装:100 ul
NRGN polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse; Rat测试范围:WB包装:100 ul
PCNA polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse; Rat测试范围:WB; IHC包装:100 ul
TFF3 polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:WB; IHC包装:100 ul
RPS27 polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse; Rat测试范围:WB包装:100 ul
RARB polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse测试范围:WB包装:100 ul
HSP90AA1 polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse; Rat测试范围:WB包装:100 ul
PKM polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse; Rat测试范围:WB; IHC包装:100 ul
FN1 polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse; Rat测试范围:IHC包装:100 ul
CEACAM5 polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:WB; IHC包装:100 ul
ALB polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:WB; IHC包装:100 ul
AFP polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:WB; IHC包装:100 ul
Chlorogenic acid洛莫司汀（标准品）  分子式：C20H26O6  性状：Powder  纯度：%
barbaloin癸氟奋乃静（标准品）  分子式：C15H20O4  性状：Powder  纯度：%
Nitidine Chloride盐酸多巴酚丁胺（标准品）  分子式：C15H18O2  性状：Powder  纯度：98.0%
2-Methoxycinnamic acid苯妥英（标准品）  分子式：C30H34O5  性状：Powder  纯度：%
L-Hyoscyamine金刚烷（标准品）  分子式：C15H14O  性状：Powder  纯度：%
Cochinchinenin C盐酸普罗帕酮（标准品）  分子式：C15H16O  性状：Powder  纯度：%
Veratrine盐酸普罗帕酮  分子式：C15H26O2  性状：Powder  纯度：98.0%
L-Tyrosine呫吨酸（标准品）  分子式：C15H22O  性状：Powder  纯度：98.0%
Convallatoxin呫吨酮（标准品）  分子式：C15H18O3  性状：Powder  纯度：97.0%
WB化学发光法检测试剂盒(人IgG) 中文名称  组织相容性复合物RTF1抗体
别    名  CDG1N; GTL 7; GTL7; KIAA0252; Ortholog of mouse gene trap locus 7; RNA polymerase associated protein RTF1 homolog; RNA polymerase-associated protein RTF1 homolog; RTF 1; RTF1; Rtf1 Paf1/RNA polymerase II complex component homolog; RTF1_HUMAN; rtf1L; YGL244W;
浓    度  1mg/1ml
规 格  0.2ml/200μg
抗体来源  Rabbit  
克隆类型  polyclonal
交叉反应  Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Cow, Horse, Rabbit
产品类型  一抗    
研究领域  干细胞 内皮细胞 表观遗传学  
蛋白分子量  predicted molecular weight: 80kDa
性    状  Lyophilized or Liquid
免 疫 原  KLH conjugated synthetic peptide derived from Human RTF1
亚    型  IgG
纯化方法  affinity purified by Protein A
储 存 液  Preservative: 15mM Sodium Azide, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH 7.4
产品应用   WB=1:100-500  ELISA=1:500-1000  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  ICC=1:100-500  IF=1:100-500
（石蜡切片需做抗原修复）
 not yet tested in other applications.
 optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.  
保存条件  Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.
Important Note  This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.