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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
43
- 英文名:
SABC Kit-FITC(POD)(Rabbit IgG)
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海一研
- 保存条件:
低温
- 规格:
100T-200T
中文名称:兔源一抗免疫组化检测试剂盒(FITC荧光+DAB显色)
英文名称:SABC Kit-FITC(POD)(Rabbit IgG)
产品规格:100T-200T
发货周期:1~3天
本试剂盒适合于一抗为兔IgG来源的免疫组化实验,DAB及FITC显色。SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的,用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质,同亲和素一样,对生物素有极高的亲和力,亲和素是一个碱性蛋白质(PI=10),经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性,对组织和细胞的非特异吸附很低,基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin-Biotin Complex,SABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶或者FITC和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶与FITC将保证SABC具有很高的敏感性。
保存:-20℃,如经常使用,可将封闭液,稀释液,20×DAB显色液B和抗荧光衰减封片剂存放于2~8℃以方便使用。
操作步骤(以石蜡切片热修复为例):
1.切片常规脱蜡至水。3% H2O2室温5~10分钟以灭活内源性酶(如果FITC,可省掉此步)。蒸馏水洗3次。
2.热修复抗原:将切片浸入0.01M枸橼酸盐缓冲液(PH6.0),电炉或微波炉加热至沸腾后断电,间隔5~10分钟后,反复1~2次。冷却后PBS(pH7.2-7.6)洗涤1~2次。
3.滴加5% BSA封闭液,室温20分钟。甩去多余液体,免洗。
4.用稀释液将一抗按一定比例稀释(稀释后的一抗 4℃可保存一周),也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗,37℃ 1小时孵育左右或20℃ 2小时左右,也可4℃过夜。PBS(pH7.2~7.4)洗涤3次,每次2分钟(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间)。
5.根据使用量,用稀释液将bio-羊抗兔IgG浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μl bio-羊抗兔IgG浓缩液,混匀即成工作液,此工作液4℃可保存一周)。滴加生物素化羊抗兔IgG工作液,20~37℃处理30分钟。PBS(pH7.2~7.4)洗涤3次,每次2分钟。
如果用荧光观察,请接步骤6、7,如果用DAB显色,请直接转至步骤8。
6.根据使用量,用稀释液将SABC-FITC浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μl SABC-FITC浓缩液,混匀即成SABC-FITC工作液。此工作液4℃可保存一周)滴加SABC-FITC工作液,20~37℃,30分钟(避光)。PBS(pH7.2~7.4)洗涤4次,每次5分钟。
7.滴加抗荧光衰减封片剂封片。荧光显微镜观察。
8.根据使用量,用稀释液将SABC-POD浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μl SABC-POD浓缩液,混匀即成SABC-POD工作液。此工作液4℃可保存一周),滴加SABC-POD工作液,20~37℃,30分钟。PBS(pH7.2~7.4)洗涤4次,每次5分钟。
9.DAB显色:根据用量,用PBS(pH7.2~7.4)配制,按1ml PBS加入50μl 20×DAB显色液A,加入50μl 20×DAB显色液B,混匀后加至切片。室温显色,镜下控制反应时间,一般在5~30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。
10.苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。
对于细胞爬片:常规固定后,PBS漂洗两次,再用0.5% Txiton X-100室温20分钟,PBS漂洗两次,3% H2O2(如果用FITC,刚可省掉此步)处理15分钟;PBS漂洗两次,下接上面第4步。
对于冰冻切片:固定后,可用PBS漂洗两次,再接上面第二步。
注意事项:
1.如果用DAB染色背景过高,在SABC反应之后,DAB显色之前,用加有0.01~0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2~7.4)洗涤切片4次,PBS洗2次,然后DAB显色。
2.如果用FITC观察背景过高,在SABC反应之后,用加有0.01~0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2~7.4)洗涤切片4次,PBS洗涤2次,然后封片观察。
3.因为免疫组化指标众多,标本不一,此步骤仅作参考。
兔源一抗免疫组化检测试剂盒(FITC荧光+DAB显色) 细胞生物学研究有以下几个方面:
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括:
①细胞核、染色体以及基因表达的研究;
②生物膜与细胞器的研究;
③细胞骨架体系的研究;
④细胞增殖及其调控;
⑤细胞分化及其调控;
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡);
⑦细胞的起源与进化;
⑧细胞工程.
细胞生物学研究的常用技术有哪些:
1.显微技术:包括显微观察,显微操作.
2细胞组分分析技术:离心分离技术,生物大分子定位技术,定量细胞化学分析技术.
3.细胞工程:细胞培养。
注意事项:
1. 本试剂盒的检测试剂中含有萤光素酶,反复冻融会导致其逐渐失活。尽管经测试本试剂反复冻融5次对于其检测效果无显著影响,为取得良好的使用效果,*次解冻后可适当分装保存。反复冻融过程中,可能会导致检测试剂中出现少量沉淀,此时宜平衡至室温,并尽量溶解。如仍有残留的不溶物,可以离心去除后使用,经测试不会影响后续的检测效果。
2. 检测时需使用白色或黑色的96孔板或384孔板。如果使用普通透明的96孔板或384孔板,相邻孔之间会产生相互干扰。
3. 使用说明中提供了检测ATP标准品的方法,实际检测细胞活力时通常并不需要检测ATP标准品。
IRS1 (Phospho-Ser312) polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse; Rat测试范围:WB 包装:100 ul
VAV1 (Phospho-Tyr174) polyclonal antibody反应物种:Human; Rat测试范围:WB 包装:100 ul
CHEK1 (Phospho-Ser280) polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse; Rat测试范围:WB 包装:100 ul
CFL1 (Phospho-Ser3) polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse; Rat测试范围:WB; IHC; IF 包装:100 ul
FOXO4 (Phospho-Ser197) polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse; Rat测试范围:WB; IHC; IF 包装:100 ul
FOXO1 (Phospho-Ser319) polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse; Rat测试范围:WB; IHC; IF 包装:100 ul
RB1 (Phospho-Ser807) polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse; Rat测试范围:WB; IHC包装:100 ul
RB1 (Phospho-Ser795) polyclonal antibody反应物种:Human测试范围:WB; IHC; IF 包装:100 ul
CHUK (Phospho-Thr23) polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse; Rat测试范围:WB; IHC包装:100 ul
FOXO1 (Phospho-Ser256) polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse; Rat测试范围:WB; IHC; IF 包装:100 ul
RPS6KA1 (Phospho-Ser352) polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse; Rat测试范围:WB 包装:100 ul
MAPT (Phospho-Ser404) polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse; Rat测试范围:WB; IHC; IF 包装:100 ul
MAPT (Phospho-Ser214) polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse; Rat测试范围:WB 包装:100 ul
MAPT (Phospho-Thr205) polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse; Rat测试范围:WB; IHC包装:100 ul
MAPT (Phospho-Ser235) polyclonal antibody反应物种:Human; Mouse; Rat测试范围:WB 包装:100 ul
Shikonin富马酸比索洛尔(标准品) 分子式:C14H20O2 性状:Oil 纯度:97.5%
Palmitic acid ethyl ester马来酸氨氯地平(标准品) 分子式:C15H20O2 性状:Oil 纯度:98.0%
Geniposide马来酸氨氯地平 分子式:C15H24O2 性状:Oil 纯度:96.5%
Swertiamarine二氟尼柳(标准品) 分子式:C15H20O 性状:Liquid 纯度:97.0%
Sesamol丹芝醇B(标准品) 分子式:C19H22O7 性状:Powder 纯度:97.5%
丁二酸洛沙平(标准品) 分子式:C15H20O2 性状:Oil 纯度:98.0%
1-Kestose幼枝含断氧化马钱子甙(标准品) 分子式:C15H20O2 性状:Oil 纯度:98.0%
Methyl hexadecanoate醋酸钠(标准品) 分子式:C15H24O 性状:Liquid 纯度:98.0%
6-Methoxyluteolin葡萄糖酸钠(标准品) 分子式:C21H26O7 性状:Oil 纯度:96.5%
兔源一抗免疫组化检测试剂盒(FITC荧光+DAB显色) 中文名称 非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶7抗体
别 名 BPTP 4; BPTP4; Dual specificity phosphatase 1; Hematopoietic protein tyrosine phosphatase; LC PTP; LCPTP; LPTP; Protein tyrosine phoshatase non receptor type stress induced; Protein tyrosine phoshatase nonreceptor type stress induced; Protein tyrosine phosphatase LC PTP; Protein tyrosine phosphatase non receptor type 7; PTPN 7; PTPNI; Tyrosine protein phosphatase non receptor type 7.
浓 度 1mg/1ml
规 格 0.2ml/200μg
抗体来源 Rabbit
克隆类型 polyclonal
交叉反应 Human, Mouse, Rat, Dog, Cow
产品类型 一抗
研究领域 肿瘤 免疫学 信号转导 激酶和磷酸酶
蛋白分子量 predicted molecular weight: 40kDa
性 状 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human PTPN7
亚 型 IgG
纯化方法 affinity purified by Protein A
储 存 液 0.01M PBS, pH 7.4 with 10 mg/ml BSA and 0.1% Sodium azide
产品应用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:100-500
(石蜡切片需做抗原修复)
not yet tested in other applications.
optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
保存条件 Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.
Important Note This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
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文献和实验当FITC在碱性溶液中与抗体蛋白反应时,主要是蛋白质上赖氨酸的r氨基与荧光素的硫碳胺键(thiocarbmide)结合,形成FITC-蛋白质结合物,即荧光抗体或荧光结合物。一个IgG分子中有86个赖氨酸残基,一般最多能结合15~20个,一个IgG分子可结合2~8个分子的FITC,其反应式如下FITC-N=C=S + N-H2-蛋白质 → FITC-NS-C-N-H2-蛋白质常用Marsshall(1958)法标记荧光抗体,也可以根据条件采用Chadwick等标记法或Clark
阳性染色,一方面可能说明你的抗体浓度过低或孵育时间过短(最好一抗4度过夜);另一方面就是封 闭时间过长。 DAB显色一定不要超过10min,最好控制在5min之内。鉴于你的结果,我建议你考虑以下问题: 1、一抗的有效性。 2、二抗的有效性。 3、DAB是否有效。 以上问题都很好解决,曾经有位战友亦遇此问题,最后弄清楚是二抗失效。 此外,一切都没问题时,DAB显色在30秒之内即出结果,并且一定要在镜下控制,否则,时间
FITC荧光二抗?――EarthOx新型DyLight 488绿色荧光
FITC荧光二抗?――EarthOx新型DyLight 488绿色荧光 FITC(Fluorescein Isothiocyanate,异硫*酸荧光素)是一种绿色荧光团,在免疫学实验里,经常被用于荧光团标记到相应的检测分子,如抗体上。FITC的纯品为黄色或橙黄色结晶粉末,易溶于水和酒精溶剂。FITC分子量为389.4,最大吸收光波长为 490~495nm,最大发射光波长为520~530nm,呈现明亮的黄绿色荧光。FITC在冷暗干燥处可保存多年,是目前应用最广泛的荧光
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