细胞凋亡检测试剂盒Ⅱ(AP)北京价格

特别提示：包括细胞凋亡检测试剂盒Ⅱ(AP)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：细胞凋亡检测试剂盒Ⅱ(AP)
产品货号：ZN1530
产品规格：20T

保存条件：-20℃冰冻保存。
保存期：一年
工作原理：
在机体内部随时都在发生着细胞的死亡。传统上用显微镜来观察细胞的死亡，其特征为核染色质的浓缩及碎片的形成。但是这种现象出现的很晚，时间也很短暂。凋亡的特征是内源性核酸内切酶被激活，细胞自身的染色质或DNA 被切割，出现单链或双链缺口，并产生与DNA断点数目相同的3’-OH 末端。末端脱氧核糖核酸转移酶(Terminal deoxynucleotidyl Transferase)可以将地高xīn标记的dUTP(DIG-dUTP)标记至3’-OH 末端，DIG-dUTP 结合在DNA断点部位，可以通过生物素化抗地高xīn抗体(Anti-DIG-Biotin)和 SABC-AP反应后，加入显色底物 BCIP/NBT予以显示。凋亡的细胞核呈紫蓝色，从而可以在显微镜下观察到着色的凋亡细胞。
试剂盒内容：
1.标记缓冲液(Labeling Buffer)1ml
2.末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT,×20)20μl
3.DIG-dUTP(×20)20μl
4.封闭液(Blocking Reagent)4ml
5.生物素化抗地高xīn抗体(×100)20μl
6..SABC-AP(×100)20μl
7.Proteinase K(×200)50μl
8.BCIP/NBT 显色剂(×20)0.2ml
9.抗体稀释液4ml
阳性对照片2张
用户自备试剂：
1.多聚赖氨酸或APES。
2.0．01M TBS(pH7.5)(配法:1L 双蒸馏水中加入8.5克氯化钠,1.2 克Tris和0.45—0.5ml纯乙酸)。
3.0.01M TBS(pH9.0--9.5)(配法:1L 双蒸馏水中加入 8.5克氯化钠,1.2克Tris)。
4.核固红—复染用。
5.水溶性封片剂。
操作步骤：
1.样品处理
(1)玻片预先用多聚赖氨酸或APES进行处理。
(2)细胞涂片和冰冻切片：最重要的是及时固定。用 4%多聚甲quán/0.01M PBS(pH7.0---7.6)室温下固定 30—60分钟。PBS洗2分钟×2次。蒸馏水洗涤 2分钟×2次。
(3)组织：应及时固定。常规 4%多聚甲quán/0.01M PBS(pH7.0---7.6)或10%中性缓冲福尔马林固定 4 小时以上，石蜡包埋。切片常规脱蜡入水(脱蜡务必干净)。
2.标本片加 0．01M TBS(pH7.5)1：200 新鲜稀释 Proteinase K 37℃消化 1—15分钟,TBS洗2分钟×3次。(细胞涂片和冰冻切片一般不消化或仅消化 10—60 秒钟。新鲜石蜡切片消化 5-10分钟。陈旧石蜡切片消化 10-15分钟)。
3.标本片加标记缓冲液(Labeling Buffer),20μl/片,以保持切片湿润。然后按每张切片取 TdT和 DIG-d-UTP 各1μl，加入18μl标记缓冲液中，混匀，甩去切片上多余液体后加混合的标记液，20μl/片。置样品于湿盒中，37℃标记2 小时。
4.0．01M TBS(pH7.5)洗2分钟×3次。
5.加封闭液 50μl/片，室温 30分钟，甩掉封闭液，不洗。
6.用抗体稀释液 1：100 稀释生物素化抗地高xīn抗体：(取1ml抗体稀释液加生物素化抗地高xīn抗体 10μl)，混匀后 50μl/片加至标本片上。置样品于湿盒中，37℃反应 30-60分钟。0.01M TBS(pH7.5)洗2分钟×3次。
7.用抗体稀释液 1：100 稀释 SABC-AP：取1ml抗体稀释液加 SABC-AP 10μl，混匀后50μl/片加至切片。37℃反应 60分钟。0.01M TBS(pH7.5)洗5分钟×4次。
8.BCIP/NBT 显色：BCIP/NBT(×20)按 1：20的比例用 0.01M TBS(pH9.0-9.5)稀释，混匀。显色液加至标本上。避光显色 20-30分钟，若无背景出现则可继续显色。充分水洗。
9.必要时可用核固红等复染。水溶性封片剂封片，也可简单地用甘油封片。
镜检。
结果判定：
细胞核中有紫蓝色颗粒者为阳性细胞，即凋亡的细胞。
注意事项：
1.试剂盒严格-20℃存放。
2.初用时如试管底部无可见的试剂，在离心机离心 3分钟，使试剂沉至管底。
3.检测过程中切勿使样品干涸。
4.BCIP/NBT 显色较慢，可适当延长显色时间。

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