T4多聚核苷酸激酶(无3′磷酸酶活性)北京现货

特别提示：包括T4多聚核苷酸激酶(无3′磷酸酶活性)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：T4多聚核苷酸激酶(无3′磷酸酶活性)
英文名称：T4 Polynucleotide Kinase
产品货号：MT0094
产品规格：200U|2000U

T4多聚核苷酸激酶能够催化ATP的γ-位磷酸基团转移到寡核苷酸链（双链或单链DNA或RNA）的5′-羟基末端以及3′-单磷酸核苷上。T4多聚核苷酸激酶还具有3′磷酸酶活性，将3′-磷酸基团从寡核苷酸的3′磷酸末端、脱氧3′-单磷酸核苷和脱氧3′-二磷酸核苷上水解掉。该酶经修饰后，其3′磷酸酶活性缺失，但仍保留了所有激酶的活性。

产品应用：
·DNA或RNA 5′末端的磷酸化，以便进行连接反应。
·DNA或RNA的末端标记，用作探针和进行DNA测序。
·将3′端已经磷酸化的单核苷酸5′磷酸化，制备pNp底物，用于添加到DNA或RNA的3′端。
·对3′端有磷酸基团的寡核苷酸的5′端进行标记。

产品组成：

组分	200U	2000U
T4 Polynucleotide Kinase(10U/μl)	20μl	200μl
10×T4 PNK Buffer	1ml	1ml×2
10mM ATP	100μl	500μl

保存条件：-20℃可保存3年。

单位定义：1 单位指 37℃条件下，30 分钟内催化1nmol 酸不溶性[32P] 掺入所需要的酶量。

使用注意事项：
1．1×T4 PNK Buffer：70mM Tris-HCl pH 7.6，10 mM MgCl₂，5 mM DTT，37℃ 温育。
2．热失活：65℃ 加热 20 分钟。
3．在放射性标记实验中，可用1× T4 多聚核苷酸激酶反应缓冲液、50pmol的γ-[32P] ATP和20单位的酶37℃温育30分钟。
4．T4多聚核苷酸激酶需要ATP才能发挥活性，但是为了适用于高活力的放射性标记反应，在随酶提供的反应缓冲液中不含ATP。因此在磷酸化修饰核酸时请单独添加终浓度0.5～1mM ATP。
5．要提高平齐末端或5’凹陷末端的磷酸化效率，可在加入T4多聚核苷酸激酶前，先将DNA溶液于70℃加热5分钟，然后冰上冷却，并加入5%（W/V）的PEG-8000。
6．一般来说，进行激酶反应之后是连接反应。在这种情况下，T4多聚核苷酸激酶反应在连接酶反应缓冲液中37℃ 温育30分钟即可。反应后的产物可直接进行连接，无需改变缓冲液和进行热失活。如果连接时需要保持其它DNA片段的去磷酸化状态，则需要在连接反应前热失活T4多聚核苷酸激酶。

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