
组织冰冻切片OCT包埋剂
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4°保存
- 保质期:
一年
- 英文名:
//
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大量
- 供应商:
普利莱
- CAS号:
//
- 规格:
120ml
组织冰冻切片OCT包埋剂 (Tissue OCT-Freeze Medium ) C1400
描述:冷室、组织块、包埋剂、切片刀之间的温度平衡于优化的切片温度(optimum cutting temperature, OCT)附近,是获得高质量冰冻切片的保证。不同的组织因构成各异而具有不同的OCT温度。当冰冻组织在接触刀刃的瞬间,局部温度短暂升高发生局部融化;随后切开的组织薄片暴露于冷室被再次骤冷冰冻。这种融化-冰冻温度变化是切片皱褶或断裂的内在原因,在此基础上切片的软硬度和厚薄度进一步影响皱褶产生(1)。在切片过程中,冰冻包埋剂也须历经与组织类似的温度变化,这就要求包埋剂必须具有与组织块相近的冰冻速度和软硬韧度。
普利莱冰冻组织切片OCT包埋剂是由高分子聚合物组成的无色透明粘稠液体,骤冷时固化,其冰冻速度和软硬韧度与组织细胞相近,因而能保证优化的OCT温度,并具有支持填充、减少皱褶和断裂等作用。可任意添加于切片机的样品架以支持和固定样品。
特点:
- 支持超薄和超厚(2~100 µm)冰冻切片并减少皱褶和断裂
- 不影响后续免疫组化、原位杂交、病理染色等操作
- 可经由水或PBS冲洗完全去除,是理想的组织冰冻包埋剂。
适用:组织和培养细胞的冰冻包埋固定。用于临床快速病理染色诊断、免疫组化、原位杂交。
组成:120 ml,4ºC 1年。无色透明粘稠液体,温度降低时逐渐变粘稠并固化。
使用前标本准备:
冰冻切片标本可采用 (1) 新鲜组织,特点是快速,但未用完的包埋组织块不能保存;(2) 使用经典方法10%甲醛室温2~10分钟固定过的组织,优点是既不影响后续步骤,包埋组织块又可长期冰冻保存,随时再用,缺点是步骤稍繁。(3) 培养细胞,800g离心10分钟收集培养细胞,用吸头或针头拨出细胞沉淀块,放入OCT包埋剂内。
应避免采用降低组织冰点的甲醇乙醇固定。本产品说明书不提供关于组织取材、渗透、固定、冰冻切片等技术信息。用户应阅读冰冻切片机操作手册,参考各种常规技术方法。
使用方法:
1. OCT包埋:用水或PBS冲洗固定的组织块,用吸水纸吸去液体。在盛标本的包埋模子内,挤出适量的包埋剂,放入组织和细胞沉淀块,加包埋剂完全埋没组织块。可用2层铝箔纸折叠成简易的模子。如有气泡可用针头或吸头吸出。
2. 冰冻:将盛有组织细胞和包埋剂的模子,正置于切片机冷室内冰冻10分钟。此时,包埋剂为乳白色固体。包埋剂和组织冷冻时体积略有膨胀,因此模子应正置,由底部向顶部进行冰冻。也可将OCT包埋的组织置于干冰或液氮,或放入-40~-70 ºC冰箱冰冻固化保存,用前取出置于切片机冷室内平衡温度(否则损坏刀)。
3.切片:可在切片机的组织卡盘(chuck)上加少许包埋剂并在其固化前嵌入组织块,然后再于组织周围加入少许包埋剂使其稳定。进行常规切片,厚度范围2~100 µm。
4. 收片后,用适量水或PBS冲洗切片3次,每次2−3分钟,洗除包埋剂。而后可进行常规组化染色、病理染色、原位杂交。未用完的组织块可冷冻储存。
附表为新鲜组织的冰冻切片OCT温度。固定过的组织的OCT温度升高相应5~10°C
| 组织 | °C | 组织 | °C | 组织 | °C |
| 子宫刮出物 | -7 | 肾 | −15 | 子宫颈 | −20 |
| 脑 | −10 | 肺 | −16 | 卵巢 | −20 |
| 肝 | −10 | 肌肉 | −16 | 前列腺 | −20 |
| 脾 | −10 | 结蹄组织 | −16 | 消化道 | −20 |
| 睾丸 | −10 | 皮肤 | −16 | 骨髓 | −20 |
| 甲状腺 | −10 | 心 | −18 | 连脂肪皮肤 | −25 |
| 唇 | −13 | 胰腺 | −20 | 乳腺 | −30 |
| 淋巴结 | −15 | 子宫 | −20 | 网膜脂肪 | −35 |
常见问题及解决方案:
| 易碎 | 冷冻过快,或标本太大 |
| 组织、包埋块从支架脱落 | 包埋剂不足,组织在包埋剂中的位置过偏 |
| 组织向前推进但不能顺利切片 | 刀和组织未固定紧,刀的角度不合适,组织未完全冷冻 |
| 切片卷曲 | Anti-roll plate不干净,切片太薄,刀钝 |
| 切片撕裂 | 组织过分冷冻,刀口受损、不洁 |
| 切片融化 | 冷室和刀的温度不正确 |
| 刀上有雾 | 切片机开盖时间过长 |
| 切片粘在 anti-roll plate | 温度不正确,anti-roll plate不洁 |
| 切片歪向一侧 | 刀口钝、受损,anti-roll plate受损 |
| 切片从玻片脱落 | 没用玻片粘附剂,切的是固定组织、脂肪含量高的标本,操作粗糙 |
| 切片水平裂痕 | 切片时标本太冷 |
参考文献:
Pearse AGE. Histochemistry, theoretical and applied, vol. 1: preparative and optical technology. 4th Ed. Edinburgh, UK: Churchill Livingstone, 1980.
普利莱基因技术有限公司坐落在北京中关村高新技术园区,由数名具有精深的学术研究能力和产品开发经验的留美博士创建,先后获得国家及中关村高新技术企业认证,依靠世界领先的技术和理念为支撑,致力于打造生命科学研究领域高品质生物试剂产品和技术服务,成为有国际影响力的、对生命科学研究和人类健康有巨大推动作用的生物技术公司,由此拉开了中国生物试剂国产化的大旗。 经过十几年积累和技术攻关,普利莱以国际产品为标准,全面完善生产流程和产品质量控制体系,并利用自身优势不断整合国内外资源,相继推出数百多种具有自主知识产权的科研试剂和试剂盒。产品范围由创建初期的蛋白质研究试剂,扩展到细胞生物学、分子生物学、生物化学、免疫学和实验医学等各类研究领域。建立了基因检测、蛋白印迹、免疫组化、基因克隆与表达、抗体制备和各类生化指标检测服务平台。 普利莱在国内最早推出高品质超敏ECL发光液,以其灵敏度高、背景干净、发光迅速、节省抗体等优势,迅速得到了广大科研工作者的青睐,占据国内市场三分之二以上的份额,打破了国外公司在中国实验室试剂领域的垄断并迫使其产品不断降价,为中国生物医学实验研究做出了应有贡献。普利莱各类总蛋白、细胞器蛋白提取纯化试剂盒、高效RNAtrip一步法RNA提取试剂、真核细胞核酸转染试剂、胆固醇、甘油三酯、葡萄糖等各类酶学生化测定试剂盒也以其优良的品质、稳定的性能和超高的性价比享誉盛名,占据着龙头地位。 未来,普利莱将秉承“优质产品,周到服务”的核心理念,以客户需求为中心,继续传承“诚信、专注、挚爱”精神,立足于生命科学领域,提供一站式全方位服务,与科研人员携手实现生物试剂“中国创造”的伟大梦想。
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文献和实验- Wang S, Bai J, Zhang Y L, et al. CXCL1-CXCR2 signalling mediates hypertensive retinopathy by inducing macrophage infiltration[J]. Redox Biology, 2022, 56: 102438.
- Lu Q, Bashir N H, Wu H X, et al. Structure, Distribution, Chemical Composition, and Gene Expression Pattern of Glandular Trichomes on the Leaves of Rhus potaninii Maxim[J]. International Journal of Molecular Sciences, 2021, 22(14): 7312.
冰冻切片免疫组织化学染色 1.新鲜组织或在-80℃保存的组织用恒冷箱冰冻切片机切片,厚度为10~40gm; 2.将切片裱于载玻片上,立即用电吹风吹干或室温放置30分钟,如不能及时染色,密封后一20℃保存; 3.染色前组织切片用冷丙酮4℃固定10―20分钟,PBS洗2次,每次5分钟; 4。必要时应用0.1%枸橼酸钠与0.1%Triton X―100的混合液将细胞膜打孔。 其余步骤同石蜡切片。SABC法染色,DAB显色大鼠小肠腺细胞核呈棕色为BrdU免疫
组织块的准备 1.调整好组织与刀片的方向 这是冰冻切片准备中极为重要的方面,使用一些包埋物可以使这项工作变得简单,在我的工作中我总结出一些经验可供参考。 a.脂肪放在最后切。脂肪由于硬度不够,对绝大多数组织均合适的温度却切不好脂肪组织,如果一刀下去,组织中的脂肪先接触刀片,就会破碎并使整个片子损坏。如果脂肪最后接触刀片,则切片过程不受干扰。最糟糕的情况是脂肪部分先接触刀片而没有包埋物的保护,包埋物可以给片子提供一个起始的缓冲,如果没有包埋,脂肪就会切碎并把整个片子破坏。当切片
接上一期:冰冻切片实验技巧(三) 学会看片子 本期我们来聊聊:脂肪组织的处理 脂肪组织无疑是冰冻切片者的绊脚石,道理很简单脂肪不会结冰,把温度降低让脂肪变硬可以切出较薄的片子,但是这个温度对同一组织中的其他成分来说显得太低而不合适切片,当脂肪破碎影响切片时这个问题就变得明显,下面是一些我的经验总结。 1.尽可能的削掉不需要的脂肪组织 当我准备切淋巴结时,我会先检查一遍,小心翼翼地除掉表面及髓内的脂肪,结内的脂肪用解剖刀刮擦掉,被膜线附近的脂肪用刀切除,这样就不需要切开












