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大量
- 英文名:
Zero Background pTOPO-Blunt Simple Cloning Kit
- 保质期:
有效期 2个月
- 供应商:
上海康朗生物科技有限公司
- 保存条件:
长时间储存于 2-8℃避光保存
- 规格:
20次x10ul
产品介绍:
本制品和传统的T4连接酶原理不同,它利用了Topoisomerase可以在瞬间(几秒钟-几分钟)、高效(接近100%)连接DNA片段的原理采用本公司独创的工艺制成。
特点:
1. 可以在瞬间(几秒钟-几分钟)完成连接。
2. 无需冰浴和热休克,室温5分钟内完成转化;无需1小时复苏,只需37℃10分钟复苏便可以涂板。从连接到涂板只需15-20分钟。
3. 无自连、零背景,无需繁琐蓝白斑筛选,见到长出的克隆便是有插入的(接近100%)。
4. 可以连接长达10kb片段(即使连接5kb片段,挑10个菌落,至少8个是有插入的),是目前世界上最简单、最快速、零背景免筛选的TOPO 平末端克隆载体。
本制品在克隆插入位点两侧不含多克隆酶切位点,需要在PCR扩增引物上导入合适的酶切位点。此时如果使用PCR扩增引物导入的酶切位点进行DNA酶切时,酶切反应将不会受到T载体上其它多克隆酶切位点上的限制酶影响,可以大大提高酶切效率,增加亚克隆成功率。
注:本TOPO载体连接体系是按照10ml计算,如果按照其它公司产品5ml计算,实际使用次数可以增加一倍,20次实际可用40次。
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- 作者
- 内容
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文献和实验polymerases possess 3´→5´ exonuclease activity that removes the 3´-A overhangs necessary for TA Cloning® and TOPO TA Cloning®. A simple procedure to add 3´ adenines to blunt-end fragments is provided below. Other protocols may be suitable
Cloning vector to 1ml of the Taq-amplified PCR product2. Incubate for 5 minutes on your bench top3. Transform One Shot® Competent E. coli.Topo平端克隆方法和长PCR片断克隆法(Zero Blunt Topo PCR Cloning Kit)(Topo XL PCR Cloning Kit)因为越来越多高确限度热稳定酶如Pfx、Pfu被用于PCR扩增,使到PCR
,ccdB基因的表达蛋白,会破坏细菌的DNA gyrase,造成细菌染色体的降解导致细菌死亡。如果有插入片断,则ccdB基因表达受到阻碍,所以细胞可生长。这样可以把高背景的缺点改善,节省筛选的时间。Topo平端克隆 与Topo TA方法一样,操作简单快速。 平端PCR 克隆 方法(Zero Blunt PCR Cloning Kit) Zero Blunt PCR 克隆 乃利用传统T4连接酶方法,但载体
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