小鼠原代肝细胞-PMH

冻存细胞接收后的处理：

1.干冰运输，收到细胞后立即转入-80℃冰箱短暂中转或直接复苏；
2.收到细胞后，若发现干冰已经完全挥发、冻存管瓶盖破裂脱落,请立即拍照后与我们联系。
 

复苏细胞接收后的处理：

1.收到细胞后，请首先检查培养瓶是否破损或漏液，培养液是否混浊，如有漏液及培养液混浊情况请立即拍照把图片发给我们。
2.75%酒精消毒瓶身后放培养箱中静置4-6h后，在显微镜下确认细胞状态并拍照100倍和200倍的照片，若有贴壁细胞脱落，可收集上清离心，将沉淀用新的培养基接种至新的培养瓶或培养皿中。
3.建议收到当天不要消化处理，如果细胞长满90%，可选择传代处理。
4.如您收到细胞3天内没有反馈相关问题，出现的细胞问题将不提供免费重发服务。
 

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
    ①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
    ②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
    ③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
    ④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
    ⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
    ⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
    ①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
    ②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
    ①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
    ②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；
    ③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
    ④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
 

晶莱生物服务流程


晶莱生物实验服务项目

动物实验	细胞生物学	病理实验
消化系统模型	细胞培养	病理染色
胃酸分泌模型	普通细胞株	HE染色
脓毒症模型	细胞缺氧培养	油红O染色
胃溃疡模型	细胞培养+支架	番红固绿染色
胰腺炎模型	干细胞培养	Masson染色
肝纤维化模型	原代细胞分离/提取/培养	天狼猩红染色
DIO肥胖模型	细胞转染/病毒感染	PAS糖原染色
胆结石模型	Trans well共培养	阿利新蓝染色
结肠炎(UC)模型	细胞增殖	甲苯胺蓝染色
脂肪肝模型	细胞计数	尼氏染色
急性肝损伤模型	生长曲线测定	LFB髓鞘染色
免疫、代谢系统疾病模型	存活曲线测定	普鲁士蓝染色
骨质疏松模型	ccK-8增殖检测	VG染色
糖尿病模型	MTT增殖检测	EVG染色
高尿酸血症模型	CFSE检测增殖-流式检测	VonKossa染色
呼吸系统模型	BrDU检测-免疫荧光法	刚果红染色
肺纤维化模型	细胞凋亡	苏丹黑B染色
慢性肺阻塞模型	Annexin V/PI流式检测细胞凋亡	Trap染色
急性肺损伤模型	WB检测凋亡相关蛋白	抗酸染色
哮喘模型	透射电镜观察凋亡小体	革兰氏染色
肺栓塞模型	Tunel染色(POD法,DAB显色)	AB-PAS染色
支气管炎模型	Tunel(荧光法,含试剂盒)	亚甲基蓝染色
泌尿生殖系统模型	DNA ladder法	苯胺蓝染色
慢性肾衰模型	细胞周期	荧光 DAPI染色
急性肾衰模型	细胞显微计数	普鲁士蓝染色
肾间质纤维化模型	PI染色	间苯二酚碱性品红染色
肾结石模型	BrdU渗入法	银染
肾炎模型	免疫荧光染色	黑色素染色
子宫内膜异位症模型	PI流式检测细胞周期	镀银染色
心血管系统模型	细胞运动	PASM 六胺银染色
冠心病模型	Transwell检测细胞迁移	VG染色
心肌梗死模型	Transwell检测细胞侵袭	富尔根染色
心脏骤停模型	细胞划痕	亚甲基蓝染色
慢性心力衰竭模型	细胞克隆	碘-碘化钾染色
动脉粥样硬化模型	集落形成法/稀释铺板方法	Goldner三色法染色
白血病模型	软琼脂克隆法	PAS-萘酚磺S染色
高血压模型	毛细管克隆法	改良苯酚品红染色
神经系统模型	体外实验血管生成	网状纤维染色
脑卒中模型	磁珠分选细胞	β-半乳糖苷酶染色
栓塞性脑梗死模型	流式分选细胞	镀银染色
脑出血模型	开机费	movat五色染色
脑损伤模型	单色	维多利亚蓝染色
脊髓损伤模型	双色	免疫组化
帕金森模型	CBA多细胞因子流式检测	免疫组化预式
老年痴呆模型	组织/血液细胞制备	免疫组化正式
应激模型	组织单细胞制备	免疫荧光（石蜡-单标）
骨骼疾病模型	中性粒细胞提取	免疫荧光（石蜡-双标）
骨折模型	其他样本细胞制备（如血液等）	免疫荧光（石蜡-三标）
骨缺损模型	外周血PBMC分离	免疫荧光（冰冻-单标）
风湿免疫性关节炎模型	线粒体组学	免疫荧光（冰冻-双标）
骨关节炎模型	线粒体膜电位检测-流式法	制片前处理
五官疾病模型	线粒体膜电位检测-免疫荧光法	石蜡组织包埋
眼科疾病模型	线粒体ROS生物含量检测--流式	特殊包埋（细胞、材料、眼球等）
鼻腔疾病模型	线粒体ROS生物含量检测--免疫荧光	软化（肝硬化、皮肤结痂、植物等）
皮肤疾病模型	线粒体通透性转换孔（mPTP）	骨组织脱钙（小）
皮肤损伤模型	溶酶体免疫荧光法	骨组织脱钙（大）
肿瘤疾病模型	线粒体+溶酶体共定位	骨组织EDTA脱钙（小）
原位瘤模型	内质网	骨组织EDTA脱钙（大）
转移瘤模型	线粒体钙瞬时变化检测-流式	石蜡白片
皮下植瘤模型	ATP检测	细胞爬片
	ADP检测
	AMP检测
流式	DNA/RNA半定量检测	基因编辑工具
组织细胞悬液处理	pcr检测mRNA	合成（3保1）片段/质粒/引物合成
细胞处理	microRNA检测	质粒载体构建
血液标本处理	LncRNA表达量的检测	过表达腺病毒载体构建包装
细胞刺激培养	CirRNA表达量的检测	shRNA腺病毒载体构建包装
单色检测	凝胶电泳	过表达慢病毒载体构建包装
双色检测	基因合成	shRNA慢病毒载体构建包装
Annexin V/PI凋亡	＜300	过表达腺相关病毒载体构建包装
细胞周期	300-1,500	shRNA腺病毒载体构建包装
	1500 - 5000	稳转细胞株
	>5000
	特殊序列
ELISA	WB	qPCR
组织匀浆处理	蛋白提取及定量一	RNA抽提
ELISA（不含试剂盒）48T/kit	WB检测一（10孔膜/指标）	mRNA引物设计及合成
ELISA（不含试剂盒）96T/kit	灰度值分析及作图一（10孔膜/指标）	miRNA引物设计及合成
ELISA（含国产试剂盒）48T/kit	蛋白提取及定量二	LncRNA引物设计及合成
ELISA（含国产试剂盒）96T/kit	WB检测二（15孔膜/指标）	CircRNA引物设计及合成
	灰度值分析及作图二（15孔膜/指标）	mRNA RT-qPCR
		miRNA RT-qPCR
		LncRNA RT-qPCR
		CircRNA RT-qPCR

收费标准/服务周期/提供结果：
欢迎咨询详谈，我们会根据您的方案及需求制定详细的服务协议。
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【晶莱生物】已开展了数千个实验外包项目。我们专注于医学课题研究，已从课题申请、方案设计、试剂采购、模型构造、标本检测、数据分析，各个环节积累了数千个成功案例经验，为数千个来自临床的科研工作者解决了大量的科研问题。更多相关实验服务信息请咨询晶莱生物