一管式反转录试剂北京现货

特别提示：包括一管式反转录试剂在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：一管式反转录试剂
英文名称：QuickQuant RT Super Mix
产品货号：WH0100
产品规格：25次|100次

本制品为一管式预混Mix，使得cDNA的合成更加的方便快捷。4×QQ-RT Super Mix中含有RT-PCR中反转录反应所需的所有试剂（QuickQuant RT Enzyme、RNase Inhibitor、Randomprimers、Oligo dT primer、dNTP Mixture、反应Buffer），加入模板RNA和RNase-Free ddH2O即可进行反应。本产品使用高效反转录酶QuickQuant RT Enzyme，可以在较短时间内高效合成Real Time PCR所用的模板cDNA，特别适合cDNA合成以后的两步法Real Time PCR检测。

本制品合成的cDNA可以用于SYBR Green法和TaqMan探针法的定量PCR分析，可以根据实验目的与我司定量PCR产品中的QuickFire qPCR PreMix（SYBR Green)和QuickFire qPCR PreMix （Probe)等定量试剂配合使用，进行更加快速和高效的基因表达分析。

产品特点：
·便捷：本产品为预混Mix形式，只需加入模板RNA和水便可以进行反应。
·快速：只需42℃，18min即可完成cDNA第一链的合成。
·高效：反转录效率可达90%以上。
·普适：通读GC含量高，二级结构复杂的RNA模板。

产品应用：
· RT-PCR
· RT-qPCR
· cDNA文库构建

使用实例：

使用本制品反转录人类细胞系293T的总RNA。以得到的cDNA为模板，分别扩增不同长度目的基因，用1%琼脂糖凝胶电泳检测。结果表明，本制品能够高效反转录至少5 kb的片段。RNA使用量为1μg；电泳条件为6 V/cm,20 min。

使用本制品反转录人类细胞系293T的总RNA。按10的倍数稀释得到的cDNA模板，使用染料法试剂对人类GAPDH基因进行qPCR检测。结果显示，本制品反转录能得到高质量的cDNA，适用于染料法qPCR检测目的基因的含量。RNA使用量为1μg，荧光定量所用试剂为SuperReal PreMix Plus（SYBR Green) （WH0103)，使用仪器为ABI 7500 Fast qPCR System。图中分别展示扩增曲线（A)，标准曲线（B)和熔解曲线（C)。

使用本制品反转录人类细胞系293T的总RNA。按10的倍数稀释得到的cDNA模板，使用探针法试剂对人类GAPDH基因进行qPCR检测。结果显示，本制品反转录能得到高质量的cDNA，适用于探针法qPCR检测目的片段的拷贝数。RNA使用量为1μg，荧光定量所用试剂为SuperReal PreMix（Probe)（WH0104)，使用仪器为ABI 7500 Fast qPCR System。图中分别展示扩增曲线（A)和标准曲线（B)。

试剂盒组成：

组分	25次	100次
4× QQ-RT Super Mix	125μl	500μl
RNase-Free ddH2O	1ml	2×1ml

储存条件：-20℃可保存12个月。

注意事项：请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1．本产品的适宜模板量范围为50ng-2 μg的总RNA，如果总RNA量大于2 μg，请按比例扩大反应体系。
2．在冰上进行操作，防止发生RNA降解。
3．不需分开变性和退火两个步骤。但是对于二级结构很复杂的RNA模板，推荐使用变性步骤，即在操作步骤之前，将模板RNA在65℃孵育5 min后迅速转移到冰上，进行下一步操作。
4．反转录体系可以根据需要相应扩大。

操作步骤：
使用QuickQuant cDNA第一链合成预混Mix合成第一链cDNA，50ng-2μg的总RNA可建立20 μl反应体系。

1．将模板RNA在冰上解冻；4× QQ-RT Super Mix和RNase-Free ddH2O在室温（15-25℃）解冻，解冻后迅速置于冰上。使用前将每种溶液涡旋振荡混匀，简短离心以收集残留在管壁的液体。
  以下操作步骤请在冰上进行。为了保证反应液配制的准确性，进行反应体系配制时，应先配制成Mix，然后再分装到每个反应管中。
2．按照下表所示配制反转录反应体系。

成分	使用量
4× QQ-RT Super Mix	5 μl
Total RNA	50ng-2μg
RNase-Free ddH2O	补足到20 μl

3．按照下表所示进行反转录反应。

反应温度	反应时间	说明
42℃	15min	反转录反应
95℃	3min	酶灭活过程

注意：
1．若后续实验为实时荧光定量PCR，逆转录产物的加量应不超过PCR体系终体积的1/10，例如50 μl的PCR反应体系，逆转录产物的加量应不超过5 μl。
2．将逆转录产物置于冰上，再进行后续PCR反应；如果需要长时间保存，请置于-20℃下保存。

RNA模板质量控制：
逆转录酶以RNA为模板合成第一链cDNA，因此模板RNA的质量直接影响逆转录结果。

1．模板的完整性：模板RNA的完整性对逆转录非常重要，若RNA模板中含有RNase酶将降解模板RNA，最后导致cDNA产物的量减少甚至无cDNA产物。
2．模板的纯度：若RNA模板中含有蛋白、盐离子、EDTA、乙醇、酚等杂质，将影响逆转录酶的活性，最终影响逆转录结果。如若含有基因组DNA将影响后续实验的准确性。
3．模板的加样量：以上操作步骤适用于模板RNA量为50ng-2 μg，如果模板RNA的量大于2 μg，请按比例扩大反应体系。

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