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- 博尔森/BIOESN
- BES2AD1802
- 中国
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
50
- 英文名：
HG TaqMan miRNA反转录试剂盒
- 保质期：
2年
- 供应商：
上海博尔森生物科技有限公司
- 保存条件：
-20°C
- 规格：
25T/100T
HG TaqMan miRNA反转录试剂盒
描述：TaqMan miRNA 反转录试剂盒采用加 A 法进行反转录，加 A 法的反转录效率远高于茎环法，因 此，采用该方法可极大的提高检测灵敏度（原理见图 1）。 该试剂盒操作简单，仅需要两步即可轻松完成 miRNA 的 cDNA 合成，合成的 cDNA 可用于所有 miRNA 的后续定 量检测。反转录完毕后采用特异性的上游引物和接头引物 进行 PCR 扩增，FAM 标记 TaqMan 探针作为荧光报告基 团进行定量检测（原理见图 1）。
TaqMan miRNA 反转录试剂盒专用于 miRNAs 分子的反转录试验，转录获得的 cDNA 产物用于 TaqMan 定量 PCR 方法检测 miRNAs 分子（仅适用 HaiGene TaqMan miRNA 定量 PCR 试剂盒，货号： TAPXXXXX）。
5 利用 HG TaqMan qPCR Kit 对上述 miRNA cDNA 产物进行 RealTime PCR 检测
内参基因可选择使用：TaqMan RNU6B miRNA 定量 PCR试剂盒适用于人、鼠等哺乳动物组织、细胞样品；TaqMan hsa-miR16 miRNA 定量 PCR 试剂盒(货号：TAP01511) 适用于来源于人、鼠全血样品。
（1）配制反应体系
根据机型选择步骤 A 或 BA: 需要添加 ROX 染料进行反应孔间信号矫正的Real-Time PCR 仪，包括：ABI 7000/7300/7500/7900 等。
按照如下组分配制 20μl PCR 反应体系：
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文献和实验TaqMan Pri-miRNA Assays：检测MicroRNA表达的起源
的便利性，还是快速循环的速度，Applied Biosystems都提供了经过验证的试剂盒，支持这些不同的分析流程。在定量前必须确保样品是不含DNA的，这一点很重要，因此分析经过了额外的验证，利用Ambion® TURBO DNA-free™ Kit来进行样品的预先纯化。 介于TaqMan® Gene Expression Assays和TaqMan® Pri-miRNA Assays共享相同的设计方法和实验流程，同样多种选择的TaqMan® Gene Expression Assays
miRNA实时荧光定量PCR 实时荧光定量PCR从1996年美国Applied Biosystems公司推出实时荧光定量PCR技术以来，该技术已经越来越广泛的应用到各类RNA的研究中，成为研究RNA必不可少的实验手段之一。目前比较常用的方法有两种：（1）TaqMan荧光探针法：该方法在特异性探针的两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。当探针完整时，荧光基团发光被淬灭基团吸收；在PCR扩增过程中，探针被降解，荧光基团与淬灭基团分离，发出可被检测到的荧光，以此来监测整个
进行反转录、PCR。所以上述两种方法分别加PolyA尾及颈环结构的方法，将miRNA配对的序列延长，然后进行正常的反转录及后续的PCR检测。颈环法只针对成熟miRNA，特异性相对较高，但操作繁琐，成本较高；加尾法可以检测到成熟miRNA及pre-miRNA，特异性稍低，但操作及引物设计简单。 分段探针捕获miRNA 近年来，研究人员发现了越来越多的miRNA，其中有很多miRNA序列相近，有的仅仅只有一个碱基差异。这些不同的miRNA虽然序列相近，但是也有着不同的来源及功能
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