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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
245
- 保质期:
12个月
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
- 规格:
100ml
| 货号 | 规格 | 产品价格 |
|---|---|---|
| YT038-LVH | 100ml | ¥380 - 3800 |
特别提示:包括Western及IP细胞裂解液在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:Western及IP细胞裂解液
产品货号:GL1467
产品规格:100ml
用途:
温和裂解细胞提取总蛋白质,主要用于Western,免疫沉淀,免疫共沉淀等。对于普通的Western、IP或co-IP,我们推荐使用本裂解液,
注意事项:
主要由Tris 、NaCl、Triton X-100组成。含有一支1.5ml PMSF。用本裂解液得到的蛋白样品,可以用BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
储存条件:-20℃,12个月
我公司销售的Western及IP细胞裂解液北京现货,质量上佳,价格普惠,欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验其他方法验证更详细的相互作用信息。 图 11:使用抗体进行 Co-IP 与使用 Strep-Tactin®XT 进行pull-down 融合蛋白沉降 pull-down IP 和 Co-IP 通过固定抗体来捕获诱饵蛋白质及其结合分子,而 pull-down 可使用带亲和标签的目的蛋白进行,在体外验证蛋白间的直接相互作用。Pull-down 是通过磁珠/琼脂糖填料固定带有标记的「诱饵」蛋白,从细胞裂解液、纯化蛋白或表达系统中捕获「猎物」蛋白,然后将复合物蛋白分离后进行凝胶或质谱分析,从而确认互作
或者互作蛋白复合物(红色+黄色)洗脱 Step 5:分析检测—Western Blot 或者质谱 常用“黑话” 以上示例图证明了 EDR1 和 EDR4 有相互作用。如果想要设计好实验,先清楚以下常用“黑话”含义。 阳性对照:证实细胞裂解物中确实存在靶蛋白(IP)或者互作蛋白对(co-IP,比如诱饵蛋白X和靶蛋白 Y),即为常说的 input。可直接取抽好的蛋白溶液进行 Western。 阴性对照:用来排除假阳性。IP/co-IP 后靶蛋白或者互作蛋白对都检测到了,固然是值得高兴
一文搞懂Co-IP、Pull-down、SPR、FRET…原理及选择标准
” Co-IP是蛋白互作研究中最常用的方法之一。利用针对bait蛋白的抗体将其从细胞或组织裂解液中沉淀下来,再通过Western blot检测prey蛋白是否一起被拉下。 它的优势是保留了较多细胞内蛋白复合物信息,适合验证已有互作假设,也能用于内源蛋白互作检测。 但Co-IP阳性只能说明两个蛋白存在于同一复合物中。A和B之间可能直接结合,也可能通过蛋白C连接。因此,如果后续要证明“直接物理结合”,还需要Pull-down、SPR等实验补充。 Co-IP还比较容易受裂解液、去垢剂、盐浓度和洗涤强度影响。互作
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