土壤DNA提取试剂盒（离心吸附柱法）

本试剂盒采用独特的脱腐缓冲液系统，可以将土壤样本中的腐殖酸尽可能的去除，并且配有的玻璃珠可有效破碎土壤样本中的各种复杂成分，保证从土壤中提取基因组DNA的完整性。使用本试剂盒回收的DNA杂质少，完整性好，可直接用于PCR、酶切等其它分子生物学下游实验。

产品特点：
·适用范围广：适用于花坛土、花盆土、农田土、山林土、淤泥、红土、黑土、粉尘等多类土壤环境样本的提取。
·操作便捷：能够集中在相对较短时间内完成实验操作。
·高纯度：与离心柱法纯化相结合，提取的DNA纯度很高，可直接用于下游实验。

提取实例：

土壤基因组DNA提取，起始量：250mg，50μl洗脱，5μl上样，1%琼脂糖凝胶电泳结果。
1、黑龙江凉水自然保护区，黑土
2、广东鼎湖山，红土
3、北京东录山自然保护区，黄土
4、浙江古田山，红土
5、西双版纳补蛙自然，红土
6、实验室粉尘
7、山林土
8、淤泥
9、农田土
10、花盆土
11、花坛土


以提取的土壤基因组为模板，进行PCR，20μl PCR体系采取6μl电泳的结果。
1、黑龙江凉水自然保护区，黑土
2、广东鼎湖山，红土
3、北京东录山自然保护区，黄土
4、西双版纳补蛙自然，红土
5、实验室粉尘
6、山林土
7、花盆土
8、花坛土
9、浙江古田山红土
10、淤泥
11、农田土

试剂盒组成：

组分	50T
缓冲液SA	45ml
缓冲液SC	5 ml
缓冲液HA	15 ml
缓冲液HB	15 ml
缓冲液GF	70 ml
漂洗液PWS	15 ml
1mm研磨珠	15g
洗脱缓冲液TE	15 ml
吸附柱CB3	50个
收集管（2 ml）	50个

保存条件：室温（15-25℃）干燥条件下可保存12个月；更长时间的保存可置于2-8℃。在2-8℃保存条件下，若产生沉淀，使用前应先将试剂盒内的溶液在室温中放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。

注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
1．新采取的土壤样本会得到更高的产率，不同样本在采样前应先查阅相应的最佳保存条件。
2．所有的离心步骤均为使用台式离心机，室温下离心。
3．在需要吸取上清液的步骤中应避免吸到沉淀，否则会堵塞吸附柱，并影响产物纯度。
4．漂洗液PWS使用前请参照瓶上标签加入无水乙醇。
5．过量的DNA可能抑制下游PCR反应，遇到这种情况建议将DNA模板进行稀释后试用。

使用方法：
使用前请先在漂洗液PWS中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

1．取750μl缓冲液SA和0.25 g研磨珠至2 ml离心管中。
2．在上述2 ml离心管中加入土壤样本0.25 g，涡旋混匀15 sec。
3．向样本中加入60 μl缓冲液SC，涡旋振荡10min至样本混匀。
  注意：使用前检查缓冲液SC是否有沉淀，若有沉淀，请在37℃加热至完全溶解后使用。
4．12000rpm（~13400×g）离心1 min。转移上清液（约500 μl)至新的2 ml离心管。
5．加入250 μl缓冲液HA，涡旋5 sec，4℃放置5 min。
6．12000rpm（~13400×g）离心1 min。转移上清至新的2 ml离心管，加入200 μl缓冲液HB混匀，4℃放置5 min。
  注意：转移上清时不要移走沉淀，否则可能降低DNA纯度。
7．12000rpm（~13400×g）离心1 min。转移上清液至新的2 ml离心管，加入1200 μl缓冲液GF颠倒混匀。
  注意：转移上清时不要移走沉淀，否则可能降低DNA纯度。
8．取上一步所得溶液700 μl加入到一个吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中)，12000rpm（~13400×g）离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
  注意：吸附柱最大容量为700 μl，请分多次过柱。
9．向吸附柱CB3中加入500 μl漂洗液PWS （用前请加入无水乙醇)，12000rpm（~13400×g）离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
10．向吸附柱CB3中加入500 μl 70%乙醇，12000rpm（~13400×g）离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
11．12000rpm （~13400×g)离心2 min，倒掉废液。
12．将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-100 μl洗脱缓冲液TE，室温放置2-5 min，12000rpm （~13400×g )离心2 min，将溶液收集到离心管中。

DNA浓度及纯度检测：
1．得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
2．DNA应在OD₂₆₀处有显著吸收峰，OD₂₆₀值为1相当于大约50μg/ml双链DNA、40/ml单链DNA。
3．OD₂₆₀/OD₂₈₀比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH2O，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。