土壤DNA提取试剂盒（离心吸附柱法)

特别提示：包括土壤DNA提取试剂盒（离心吸附柱法)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：土壤DNA提取试剂盒（离心吸附柱法)
英文名称：Extraction kit for genomic DNA from soil
产品货号：WH0008
产品规格：50次

本试剂盒采用独特的脱腐缓冲液系统，可以将土壤样本中的腐殖酸尽可能的去除，并且配有的玻璃珠可有效破碎土壤样本中的各种复杂成分，保证从土壤中提取基因组DNA的完整性。使用本试剂盒回收的DNA杂质少，完整性好，可直接用于PCR、酶切等其它分子生物学下游实验。

产品特点：
·适用范围广：适用于花坛土、花盆土、农田土、山林土、淤泥、红土、黑土、粉尘等多类土壤环境样本的提取。
·操作便捷：能够集中在相对较短时间内完成实验操作。
·高纯度：与离心柱法纯化相结合，提取的DNA纯度很高，可直接用于下游实验。

提取实例：

土壤基因组DNA提取，起始量：250mg，50μl洗脱，5μl上样，1%琼脂糖凝胶电泳结果。
1、黑龙江凉水自然保护区，黑土
2、广东鼎湖山，红土
3、北京东录山自然保护区，黄土
4、浙江古田山，红土
5、西双版纳补蛙自然，红土
6、实验室粉尘
7、山林土
8、淤泥
9、农田土
10、花盆土
11、花坛土


以提取的土壤基因组为模板，进行PCR，20μl PCR体系采取6μl电泳的结果。
1、黑龙江凉水自然保护区，黑土
2、广东鼎湖山，红土
3、北京东录山自然保护区，黄土
4、西双版纳补蛙自然，红土
5、实验室粉尘
6、山林土
7、花盆土
8、花坛土
9、浙江古田山红土
10、淤泥
11、农田土

试剂盒组成：

组分	50T
缓冲液SA	45ml
缓冲液SC	5 ml
缓冲液HA	15 ml
缓冲液HB	15 ml
缓冲液GF	70 ml
漂洗液PWS	15 ml
1mm研磨珠	15g
洗脱缓冲液TE	15 ml
吸附柱CB3	50个
收集管（2 ml）	50个

保存条件：室温（15-25℃）干燥条件下可保存12个月；更长时间的保存可置于2-8℃。在2-8℃保存条件下，若产生沉淀，使用前应先将试剂盒内的溶液在室温中放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。

注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
1．新采取的土壤样本会得到更高的产率，不同样本在采样前应先查阅相应的zuì佳保存条件。
2．所有的离心步骤均为使用台式离心机，室温下离心。
3．在需要吸取上清液的步骤中应避免吸到沉淀，否则会堵塞吸附柱，并影响产物纯度。
4．漂洗液PWS使用前请参照瓶上标签加入无水乙醇。
5．过量的DNA可能抑制下游PCR反应，遇到这种情况建议将DNA模板进行稀释后试用。

使用方法：
使用前请先在漂洗液PWS中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

1．取750μl缓冲液SA和0.25 g研磨珠至2 ml离心管中。
2．在上述2 ml离心管中加入土壤样本0.25 g，涡旋混匀15 sec。
3．向样本中加入60 μl缓冲液SC，涡旋振荡10min至样本混匀。
  注意：使用前检查缓冲液SC是否有沉淀，若有沉淀，请在37℃加热至完全溶解后使用。
4．12000rpm（~13400×g）离心1 min。转移上清液（约500 μl)至新的2 ml离心管。
5．加入250 μl缓冲液HA，涡旋5 sec，4℃放置5 min。
6．12000rpm（~13400×g）离心1 min。转移上清至新的2 ml离心管，加入200 μl缓冲液HB混匀，4℃放置5 min。
  注意：转移上清时不要移走沉淀，否则可能降低DNA纯度。
7．12000rpm（~13400×g）离心1 min。转移上清液至新的2 ml离心管，加入1200 μl缓冲液GF颠倒混匀。
  注意：转移上清时不要移走沉淀，否则可能降低DNA纯度。
8．取上一步所得溶液700 μl加入到一个吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中)，12000rpm（~13400×g）离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
  注意：吸附柱zuì大容量为700 μl，请分多次过柱。
9．向吸附柱CB3中加入500 μl漂洗液PWS （用前请加入无水乙醇)，12000rpm（~13400×g）离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
10．向吸附柱CB3中加入500 μl 70%乙醇，12000rpm（~13400×g）离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
11．12000rpm （~13400×g)离心2 min，倒掉废液。
12．将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-100 μl洗脱缓冲液TE，室温放置2-5 min，12000rpm （~13400×g )离心2 min，将溶液收集到离心管中。

DNA浓度及纯度检测：
1．得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
2．DNA应在OD₂₆₀处有显著吸收峰，OD₂₆₀值为1相当于大约50μg/ml双链DNA、40/ml单链DNA。
3．OD₂₆₀/OD₂₈₀比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH2O，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。

除了土壤DNA提取试剂盒（离心吸附柱法),，我公司还供应以下相关产品：



名称：柱式动物DNA提取试剂盒
货号：BTN71206
规格：50次
本试剂盒是在我司动物DNA提取试剂盒的基础上改良而得的柱式升级产品，主要用于快速提取新鲜或冷冻的动物组织中的基因组DNA。

产品特点：
1. DNA更加纯净，大多数DNA样品的OD260/280值在1.8-1.9之间。
2. DNA产率一般在200μg/g左右(跟组织种类密切相关)。
3.可直接用于PCR、酶切、杂交等后续反应。
4. 操作更加简单，离心吸附操作代替离心沉淀，整个过程室温操作约10分钟，适合大规模样品处理。
5. 安全无毒，本试剂盒对人体无毒，无腐蚀性和刺激性气味。
6. 性价比高，质量和国外同类产品相当，但价格更便宜。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	40ml
溶液B	20ml
溶液C	50ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液2.0	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存、有效期一年。

使用方法：
注意：溶液A容易产生沉淀，溶液B十分粘稠，用前均需要在65℃水浴中加热使沉淀溶解或粘稠度降低，用前充分摇匀。

1. 根据使用材料的不同进行下列操作：
a)对贴壁细胞：吸尽培养液，在每10平方厘米细胞中加入0.8mL预热的溶液A，用枪充分吹打以确保细胞全部裂解，然后把裂解液转移到1.5mL塑料离心管中。
b)对悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，在每1-5×106悬浮细胞中加入0.8mL预热的溶液A，用枪充分吹打以确保细胞全部裂解。然后把裂解液转移到1.5mL塑料离心管中。如果是fibroblasts或carcinoma细胞，0.8mL溶液A的细胞使用量不要超过1×106个细胞。
c)对新鲜或冷冻的组织：先将剪切成小块的新鲜组织或冷冻保存的组织放入10mL或15mL塑料离心管中，每50-100mg组织加0.8mL预热的溶液A，用剪切式匀浆器匀浆30秒左右，然后把裂解液转移到1.5mL塑料离心管中。对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织(细胞中含大量正在复制的DNA)，建议组织的使用量不要超过50mg。
d)对DNAhold保存组织：先用纸吸去DNAhold液体后再剪切成小块，其余操作同新鲜或冷冻组织的处理。
2. 加入0.4mL预热的溶液B到裂解液中。由于溶液B十分粘稠，可将1mL枪头剪掉一截再用，也可以用称量方法加0.4 g。加入溶液B后需要颠倒数次充分混匀。
3. 65℃水浴5-10分钟。如果室温放置，DNA产量将降低10-20%。
4. 加入0.2mL自备lǜ仿，振荡器上充分振荡混均30秒，此时溶液将呈乳白色。一定要确保离心管底的液体被震荡起来。
5. 12000～15000g室温离心2分钟。上清透明，中间层为白膜(蛋白层)。
6.小心将上清液平均转移到两个新的离心管中，避免触及中间的白膜。
7. 每个管中加入1.5倍体积的溶液C，充分颠倒混匀。
8. 分两次上柱(即先转移一半的混合液到离心吸附柱中，室温放置2分钟，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液，然后再将剩下的混合液到离心吸附柱中，室温放置2分钟，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液)。
9. 加0.7mL通用洗柱液到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
10. 加0.3mL通用洗柱液到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
11. 12000～15000g室温再离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会污染DNA。
12.室温放置半分钟使残留乙醇挥发。
13. 将离心吸附柱转移到一新的1.5mL塑料离心管中，加入50-100μL DNA洗脱液2.0，室温放置离心吸附柱1-2分钟。
14. 12000～15000g室温离心半分钟，离心管中溶液即为DNA样品，可以立即使用或存放于冰箱待用。