WE0205型磁珠法DNA纯化回收试剂厂家

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北京百奥莱博专业生产销*(代"售")WE0205型磁珠法DNA纯化回收试剂厂家，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：WE0205型磁珠法DNA纯化回收试剂厂家
产地：国产|进口
英文名：MagBeads DNA Purification Kit
编号：WE0205
品牌：百奥莱博
  本试剂提供了一种简单、快速、高效的核酸纯化方法。该产品可用于二代测序建库时DNA的选择性或非选择性回收，以及PCR产物的纯化回收。MCPure与样品按一定比例混合后，磁珠选择性将核酸吸附。经两步漂洗后，洗脱得到的DNA纯度高，A260/A280的比值在 1.7-1.9之间, A260/A230的比值通常在2.0以上。经该试剂盒纯化得到的DNA适用于PCR，Real-Time PCR， 测序，southern blotting等实验。

试剂盒组成：

 

组份	96次
Buffer KCL	96ml
Buffer KCW1(浓缩液)	72ml
Buffer KCW2(浓缩液)	60ml
Buffer EB	30ml
蛋白酶K	2×25mg
蛋白酶K 储存液	2×1.25ml
Magbeads PN	4ml

自备仪器及试剂：磁力架|80%乙醇|洗脱液：Buffer EB(10 mM Tris-HCl, pH 8.0)；去离子水(pH在7.0-8.0之间)。

产率举例：

片段长度	典型产率
5000 bp	高至90%
1000 bp	高至90%
500 bp	高至80%
200 bp	高至70%

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、冰冻、离心、超声会对MCPure中的磁珠造成不可逆的损害。
2、MCPure中磁珠长期放置后会聚集成团，从而使磁珠表面积减小，降低样品回收得率，使用前一定要涡旋振荡彻底混匀磁珠。
3、使用前，建议将MCPure涡旋震荡混匀后分装到1.5ml的离心管中，每管分装1mlMCPure。
4、本试剂不适用于纯化回收小于100 bp的DNA片段，如果要回收小于100 bp的DNA片段，建议将MCPure的用量增加到样品体积的4倍。
5、进行DNA的选择性回收时，MCPure对于DNA溶液中的离子浓度较为敏感。不同厂家的二代测序建库试剂得到的接头连接后的DNA溶液以及PCR扩增产物中离子浓度不同，所以用MCPure做DNA选择性回收时,试剂用量有所不同。

操作步骤：
1、涡旋振荡MCPure 20秒，使其彻底混匀为均一溶液。
2、向1.5ml的离心管中加入纯化的DNA溶液。
3、向上一步的离心管中加入2倍样品体积的MCPure，涡旋震荡5秒后室温静置5分钟。
4、将上一步的离心管放于磁力架上，直至磁珠完全吸附(约需5分钟)。
5、保持离心管固定于磁力架上，彻底弃去溶液，期间避免接触磁珠。
6、继续保持离心管固定于磁力架上，向离心管中加入250μl新鲜配置的80%乙醇。
7、保持离心管固定于磁力架上，待悬起的磁珠完全吸附后彻底弃去乙醇。
8、重复步骤6-7两次。
9、保持离心管固定于磁力架上静置放置10分钟，使乙醇完全挥发干净。
10、将离心管从磁力架上取下，加入20-100μl EB(自备)或去离子水，涡旋振荡使磁珠完全重悬于洗脱液中后，室温放置5分钟。
11、将离心管放于磁力架上直至磁珠完全吸附(约需5分钟)。
12、将洗脱液转移至一个新的1.5ml离心管中。此时，可弃去磁珠。

纯化回收得率的计算：
我们建议通过琼脂糖电泳纯化前后的样品进行回收得率的计算。我们不建议通过260 nm处的光吸收值来计算回收得率。因为溶液中单链、双链DNA和dNTP以及一些纯化前的某些杂质在260 nm处都有光吸收，这样在计算回收前样品中DNA浓度时会得到一个假的、虚高的DNA浓度。

储存条件：室温(15～30℃)

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WE0205型磁珠法DNA纯化回收试剂厂家关键词：磁珠法DNA纯化回收试剂,WE0205,MagBeads DNA Purification Kit


·固定组织基因组DNA提取试剂盒
编号：WE0171
英文名称：FFPE DNA Extraction Kit
规格：50次
  本试剂盒适用于从福尔马林固定、石蜡包埋的组织中有效纯化总DNA，包括基因组DNA和线粒体DNA。本品使用专门优化的裂解液和蛋白酶K，释放福尔马林固定或组织切片样本中的DNA，无需过夜操作；消化后的样品在较高的温度孵育后，去除由福尔马林交联造成的抑制作用，有效提高DNA的产量和纯度；优化的缓冲系统使裂解液中的DNA可特异结合到硅胶吸附膜上，而其他污染物可流过膜；PCR和酶反应的抑制剂以及残留的杂质可通过两步漂洗步骤有效去除，最后使用低盐缓冲液或水洗脱，即可获得高纯度DNA。经过纯化的DNA可以直接用于PCR、Real-time PCR、SNP基因分型、STR基因分型和药物基因组学研究等。

试剂盒组成：

组份	50次
Buffer GTL	15ml
Buffer GL	15ml
Buffer GW1(浓缩液)	13ml
Buffer GW2(浓缩液)	15ml
Buffer GE	15ml
蛋白酶K	25mg
蛋白酶K 储存液	1.25ml
吸附柱DS及收集管	50套

自备试剂：无水乙醇、10mM PBS(PH7.4)(固定液中的组织)。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、向蛋白酶K 中加入1.25ml 蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
2、获得样品后，要尽快将样品在4%-10%的福尔马林中固定，固定时间以14-24小时为宜，时间过长易导致基因组断裂，影响下游实验。
3、确保包埋前的样品彻底脱水，残留的福尔马林会抑制蛋白酶K 的作用。
4、第一次使用前应按试剂瓶标签说明先在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
5、使用前请检查Buffer GTL和Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer GL和Buffer GTL于56℃水浴重新溶解。
6、如果下游实验对RNA污染比较敏感，可以在加入Buffer GL前加入4μl DNase-Free的RNase A(100 mg/ml)，RNase A本试剂盒并未提供，如果需要可单独向本公司订购，货号：WE0225S。

操作步骤：
1、样本处理：
a. 石蜡包埋样本：用手术刀将组织块中多余的石蜡修剪掉，露出组织。
b. 福尔马林等固定液中的样本：取约20 mg的样本，切成小块，置于离心管中，加入500μl 10mM PBS(PH7.4),涡旋振荡，12000rpm(～～13400×g)离心1分钟，重复3次，可直接进行第7步操作。
2、将组织块切成5-10μM的薄片。
注意：如果样品表面已经暴露在空气中，请将接触空气的2-3片弃掉不用。
3、取约1×1cm2的切片(共约4-5片切片)置于离心管(自备)中，加入1ml二甲*，盖紧管盖，涡旋震荡10秒。
4、12000rpm离心2分钟，小心吸弃上清，注意不要吸弃沉淀。
5、加入1ml无水乙醇，涡旋震荡混匀。12000rpm离心2分钟，弃上清，注意不要吸弃沉淀。
注意：乙醇可以除去样品中残余的二甲*。
6、打开管盖，室温或最高至37℃孵育10分钟，直至无乙醇残留。
7、加入180μl Buffer GTL，重悬沉淀；加入20μl 蛋白酶K ，涡旋震荡混匀。
8、56℃孵育1小时，直至样品完全溶解。90℃孵育1小时。短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
注意：
1)此步骤的目的是修复由甲醛变性的核酸，孵育的温度过高或时间过长可能造成DNA断裂，产生DNA碎片。
2)56℃孵育后的样品可置于室温，直至水浴锅或干浴锅温度达到90℃后再把样品置于90℃孵育。
3)如需除去RNA，可将样品温度降到室温后，加入4μl浓度为100 mg/ml 的RNase A溶液(货号：WE0225S)，震荡混匀，室温放置5-10分钟。
9、加入200μl Buffer GL，涡旋震荡彻底混匀。加入200μl无水乙醇，涡旋震荡彻底混匀。短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
注意：
1)加入Buffer GL和无水乙醇后要立即充分混匀。
2)如果需要对多个样品进行操作，可以将Buffer GL和无水乙醇事先混匀后加样。
10、将步骤9所得溶液全部加入已装入收集管的吸附柱中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
11、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
12、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
13、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟以彻底晾干。
注意：这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续酶促反应(酶切、PCR等)。
14、将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中，向吸附柱的中间部位悬空加入20-100μl Buffer GE或灭菌水，室温放置2-5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
3)用另外的20-100μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
4)如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤14所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，重复步骤14；若洗脱体积小于100μl，可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg，推荐用20μl Buffer GE或灭菌水洗脱。
5)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。

储存条件：室温(15～30℃)。


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精子形态学快速染色液(Diff-Quik法)   3×20ml|3×100ml
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