用于 RT-PCR 的 SuperScript™ 第一链合成

用于 RT-PCR 的 SuperScript™ 第一链合成系统经过优化，以从纯化 poly(A)+ 或总 RNA 合成第一链 cDNA。此系统可与低至 1 ng 或高达 5 µg 的总 RNA 一起使用。合成后，可通过 PCR 用特异性引物扩增 cDNA，而无需中间有机提取或乙醇沉淀。结合 PCR 时，该系统可用于检测稀有信息的存在，量化少量细胞的特异性 mRNA 的量或克隆特异性 cDNA，而无需构建整个 cDNA 文库。该系统具有灵活性，可使用任何 PCR 酶。结合 AccuPrime™Taq DNA 聚合酶或 Platinum™Taq DNA 聚合酶进行更高特异性 PCR，或结合 AccuPrime ™Pfx DNA 聚合酶进行高保真克隆应用。

SuperScript II RT
第一链 cDNA 合成反应由 SuperScript™ II 反转录酶 (RT) 催化。这种酶经过基因改造，可降低在第一链反应期间降解 mRNA 的 RNase H 的活性，与使用 RNase H+ RT 时相比，可进行更多全长 cDNA 合成并提供更高的第一链 cDNA 得率。因为 SuperScript™ II RT 不会受到核糖体和转运 RNA 的显著抑制，所以可使用其从总 RNA 制备中高效合成第一链 cDNA。该酶表现出更高的热稳定性，可在高达 50°C 的温度下使用。

使用 SuperScript™ 第一链合成系统进行 RT-PCR
该系统已经过优化，以从不同量的起始材料合成第一链 cDNA。在此优化过程中，已降低 SuperScript™ II RT 浓度并向系统中添加了 RNaseOUT™ 重组 RNase 抑制剂。此外，已修改反应条件，以进一步提高系统的灵敏度。使用该试剂盒，您可以使用总 RNA 或 poly(A)+选定 RNA（由 oligo(dT)、随机引物或基因特异性引物引发）合成第一链 cDNA。然后，在另一根管中使用目标基因特异性引物进行 PCR。