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- 11904018
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- 2025年09月23日
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鹿森生物
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低温
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瓶
用于 RT-PCR 的 SuperScript™ 第一链合成系统经过优化，以从纯化 poly(A)+ 或总 RNA 合成第一链 cDNA。此系统可与低至 1 ng 或高达 5 µg 的总 RNA 一起使用。合成后，可通过 PCR 用特异性引物扩增 cDNA，而无需中间有机提取或乙醇沉淀。结合 PCR 时，该系统可用于检测稀有信息的存在，量化少量细胞的特异性 mRNA 的量或克隆特异性 cDNA，而无需构建整个 cDNA 文库。该系统具有灵活性，可使用任何 PCR 酶。结合 AccuPrime™Taq DNA 聚合酶或 Platinum™Taq DNA 聚合酶进行更高特异性 PCR，或结合 AccuPrime ™Pfx DNA 聚合酶进行高保真克隆应用。
SuperScript II RT
第一链 cDNA 合成反应由 SuperScript™ II 反转录酶 (RT) 催化。这种酶经过基因改造，可降低在第一链反应期间降解 mRNA 的 RNase H 的活性，与使用 RNase H+ RT 时相比，可进行更多全长 cDNA 合成并提供更高的第一链 cDNA 得率。因为 SuperScript™ II RT 不会受到核糖体和转运 RNA 的显著抑制，所以可使用其从总 RNA 制备中高效合成第一链 cDNA。该酶表现出更高的热稳定性，可在高达 50°C 的温度下使用。
使用 SuperScript™ 第一链合成系统进行 RT-PCR
该系统已经过优化，以从不同量的起始材料合成第一链 cDNA。在此优化过程中，已降低 SuperScript™ II RT 浓度并向系统中添加了 RNaseOUT™ 重组 RNase 抑制剂。此外，已修改反应条件，以进一步提高系统的灵敏度。使用该试剂盒，您可以使用总 RNA 或 poly(A)+选定 RNA（由 oligo(dT)、随机引物或基因特异性引物引发）合成第一链 cDNA。然后，在另一根管中使用目标基因特异性引物进行 PCR。
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文献和实验性，因而即使是最具挑战性的模板也可以进行有效的RT-PCR.。 通过SuperMix形式快速合成cDNA SuperScript™ III First—Strand Synthesis SuperMix将所有进行强大的、灵敏的第一链cDNA合成所必须的组分组合成快速、易于使用的 SuperMix形式。SuperMix形式包含 2x RT缓冲反应混合物、dNTPs、MgCl2、 以及由SuperScript™ III RT和RNaseOUT™.组成的酶混合物。也提供优化的退火缓冲
37°C-50°C ThermoScript™ RT 42°C-65°C RNA在高于65℃时开始水解，对于≤1kb的RNA第一链合成温度可以为70℃，对于＞1kb的RNA则需要＜65℃。 Tth热稳定聚合酶在Mg 存在条件下 作为DNA聚合酶，在Mn 存在条件下作为RNA聚合酶。它可以在最高65℃条件下保温。然而，PCR过程中Mn 的存在会降低忠实性，这使得Tth聚合酶不太适合用于高精确度的扩增，如cDNA的克隆。另外，Tth的逆转录效率较低，这会降低灵敏
随机引物 适用于长的或具有发卡结构的 RNA。适用于 rRNA、mRNA、tRNA 等所有 RNA 的反转录反应。主要用于单一模板的 RT-PCR 反应。 Oligo dT 适用于具有 PolyA 尾巴的 RNA。（原核生物的 RNA、真核生物的 Oligo dT rRNA 和 tRNA 不具PolyA 尾 巴。）由于 Oligo dT 要结合到 PolyA 尾巴上，所以对 RNA 样品的质量要求较高，即使有少量降解也 会使全长 cDNA 合成量大大减少。 基因特异性引物 与模板序列互补
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