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- 2025年07月14日
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真实实验服务商-普拉特泽生物
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RIP检测
优秀案例展示
一、实验介绍
核酸和蛋白质是组成生命的主要物质，研究细胞内RNA与蛋白结合情况，可以了解转录后调控网络的动态过程，帮助我们发现的miRNA的调节靶点，RIP检测实验是应用于蛋白与RNA互作关系的重要参考。
二、实验原理
RIP实验研究的是RNA-蛋白之间的相互作用，运用抗体或表位标记物捕获细胞核内或细胞质中内源性的RNA结合蛋白，通过免疫学方法将RNA-蛋白复合物一起分离出来，通过对目的片段的纯化与检测，从而分析蛋白质和RNA相互作用的信息。
三、实验方法
二、实验原理
RIP实验研究的是RNA-蛋白之间的相互作用，运用抗体或表位标记物捕获细胞核内或细胞质中内源性的RNA结合蛋白，通过免疫学方法将RNA-蛋白复合物一起分离出来，通过对目的片段的纯化与检测，从而分析蛋白质和RNA相互作用的信息。
三、实验方法
第一步：细胞裂解液的制备
第二步：磁珠与抗体的准备
第三步：RNA结合蛋白免疫沉淀
第四步：用蛋白酶ķ对RNA-蛋白复合物进行消化
第五步：RNA纯化
第六步：对结合在复合物上的RNA反转录，合成cDNA
第七步：Q-PCR验证RNA
四、技术总结
一、常见问题
1、经过免疫沉淀后的RNA浓度过低；
2、Input组目的条带无扩增；
3、RNA纯度未在1.8-2.1之间；
4、阴性对照IgG反应中有目的条带。
二、注意事项
1、RIP反应体系中的试剂和抗体中均需保证无RNA酶；
2、细胞样本的数量较大，应按照所需要求提供细胞样本数量；
3、选购的相应的抗体应达到IP实验级别，并通过阴性实验反馈结果可信性。
送检与交付标准
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