pCE2-TA-Blunt-CDK2-HA人源基因模板质粒

基因克隆的几种常用方法

。 图6　phage display克隆基因示意图 Phage　display的基本操作过程为:(1)提取某一病原体基因组DNA，用超声波将DNA切割成500～1 500的片段;(2)将片段末端用T4DNA聚合酶处理后，与载体DNA(phagemid)连接形成噬菌体质粒。用这些质粒与辅助噬菌体(helper　phage)同时转染大肠杆菌。phagemid在大肠杆菌内包装成噬菌体，大量繁殖，同时将插入的外源基因片段表达，表达产物主要集中在噬菌体颗粒的表面；(3)将特定的受体

基因重组中不可不知的知识点精简概括

technology)。 (二)工具酶 1.限制性核酸内切酶(restriction endonuclease) 识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶。是细菌内存在的保护性酶。分为I、II、III三类。II类酶识别序列特点为回文结构。 限制性核酸内切酶作用后产生两种末端：钝性末端(blunt end)粘性末端(sticky end) 限制性核酸内切酶识别序列长度为4~8个bp。不同酶切产生的相同粘性末端称配伍末端

常用的分子生物学基本技术

。 磷酸钙共沉淀法 将氯化钙、DNA和磷酸盐缓冲液混合，形成磷酸钙微沉淀 ，附着于细胞膜并经过细胞内吞作用耐是入细胞质。该方法的转化效率通常很低。 脂质体染法 指质体能在体内或体外提供运载外源性遗传物质进入细胞的载体。脂质体介导的基因转移的最大优势在于能在活体内应用。 受体介导的基因转移 依靠受体介导的细胞内吞途径以转移外源基因。受体介导的基因转移方法是在质粒DNA和某种特异的多肽（配体）之间形成复合体，而这种多肽能为细胞表面的肥体所识别。如若将DNA在体内运送至肝内，可以选