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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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上海研生
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52
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详见说明书
NCI-H2087以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。
1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。
2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。
3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用 Countess®自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。
4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。
注：离心速度和时间取决于细胞种类。
5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。
6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。
7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低 1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。
资源名称 NCI-H2087
种属 人非小细胞肺腺癌细胞
形态 上皮样
培养方法
培养基 DMEM/F12(1:1):Ham＇sF12/DMEMedium(DMEH-16/F-1250%Mixturew/oHEPES,withNEAAMedium)0.02mg/ml胰岛素＋0.01mg/ml转铁蛋白＋25nM亚砷钠＋50nM氢化可的松＋1ng/mlEGF＋0.01mM乙酰胺＋0.01mM磷酸乙＋100pM三碘甲腺原氨酸＋0.5%(w/v)牛血清白蛋白＋10mMHEPES＋0.5mM酮酸钠＋2mML-谷氨酰胺。
传代方法 ﾐᣪ㲸‚
具体操作：
1.预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。
2.用75％酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。
3.正确摆放使用的器械：保证足够的*作空间，不仅便于*作而且可减少污染。
4.点燃酒精灯：注意火焰不能太小。
5.准备好将要使用的消毒后的空培养瓶，放入微波炉内高火，8分钟再次消毒。
6.取出预热好的培养用液：大鼠主动脉平滑肌细胞取出已经预热好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。
7.从培养箱内取出细胞：注意取出细胞时要旋紧瓶盖，用酒精棉球擦拭显微镜的台面，再在镜下观察细胞。
8.打开瓶口：将各瓶口一一打开，同时要在酒精灯上烧口消毒。
特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
运输和保存：
NCI-H2087视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。
57407-08-6高端化学试外周蛋白2(PRPH2)检测试盒(酶免疫吸附试验法)
HPLC≥98%ICE蛋白酶激活因子检测试盒10mgCys
Annexin A13FastDigest® XapI50 react小鼠神经细胞粘附分子1(NCAM1)免疫试剂盒
57407-08-6高端化学试光导蛋白(PDC)检测试盒(酶免疫吸附试验法)
HPLC≥98%I 型胶原蛋白检测试盒20mgCagA-Ab
phospho-ACTH (Ser168)FastDigest® XapI100 react小鼠神经特异性烯醇化酶(NSE)免疫试剂盒
高端化学试网蛋白(PLEC)检测试盒(酶免疫吸附试验法)
异土木香内酯进口/国产KCNK9/KCNK3 敏感离子通道蛋白3体鉴别
phospho-AKT1 (Ser246)FastDigest® AlwNI (CaiI)50 react小鼠神经肽Y(NPY)免疫试剂盒
NCI-H2087高端化学,合成试, 2--5-硝苄
Dextran 40 Calibration进口、国产9004-54-0100mg
STAT5英文名称：Phospho-TORC2 (Ser171)G蛋白偶联受体GPR12蛋白抗体
高端化学,固相合成, 4-胺
Dextran 70 Calibration进口、国产9004-54-0100mg
STAT6英文名称：TRP2G蛋白偶联受体GPR110蛋白抗体
高端化学,合成试, 棕榈异酯
Dextran 250 Calibration进口、国产9004-54-0100mg
SYK英文名称：TWIST proteinG蛋白偶联受体GPR125蛋白抗体
注意事项：
1. 接收到细胞，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。
2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
6.1000rpm，5min离心，重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。
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文献和实验一、实验材料NCI-H1299，购自上海晶莱生物技术有限公司。表 2.1.1 主要试剂试剂与耗材厂家（货号）细胞培养瓶FALCON 中国（353014）Penicillin/streptomycin solution（KGY002）0.25% Tripsin-EDTA（BK-E3076）PBS（BK330-2）胎牛血清GIBCO 美国（10270-106）1640 培养基Hyclone 美国（SH3080901）Annexin V-FITC/PI 凋亡试剂盒 二、实验仪器表 2.2.1 主要
Throughput Genotyping） NCI 利用 96.96 Dynamic Array，使用更少试剂，在更短时间内进行 SNP 关联研究（一天可处理达70,000个基因型, call rate 为99%以上, 最高达99.7%） http://cgf.nci.nih.gov/development/laboratory.html · 突变检测 / 拷贝数变异（Copy Number Variation, CNV) IFC把样品分到765 个6nL小反应仓，大幅提高样品浓度，进行 PCR 反应
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