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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
负20度
- 保质期:
一年
- 库存:
100
- 供应商:
上海雅吉生物科技有限公司
- 规格:
50T/染料法/探针法
| 规格: | 50T | 产品价格: | ¥1490.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 染料法 | 产品价格: | ¥2490.0 |
| 规格: | 探针法 | 产品价格: | ¥3490.0 |
所以从中药材中提取可以用于 PCR 的 DNA 比从新鲜植物中提取要困难很多。为解决这一问题,公司在植物 DNAOUT 产品基础上开发了Flos mume梅花探针法PCR鉴定试剂盒 。
其特点如下:
1. 适合于大多数药材。
2. 得到的 DNA 纯净,OD260/280 一般都在 1.6 以上,原液或 100 倍之内的稀释液一般都能直接作为 PCR 模板。
3. 操作简单,整个过程只需要三十分钟左右。
4. 试剂无毒无害,环保卫生。
Flos mume梅花探针法PCR鉴定试剂盒 使用方法
1. 65℃预热溶液 A,待其沉淀溶化后,充分混匀,取 0.75 mL 加入到 10-15mL的塑料离心管中并放置于 65℃待用。
2. 称取 20 mg 左右的中草药,先剪成或研磨成微小的碎片,然后转移到预热的溶液 A 中匀浆,匀浆过程中将产生大量泡沫,属于正常现象。也可以液氮研磨后将中草药粉末加入到预热的溶液 A 中(建议不要在陶器或玻璃研钵中研磨,因为其主要成分二氧化硅会非特异地吸附 DNA,降低 DNA 回收量。但可以在塑料研钵中研磨)。
3. 将匀浆液置于 65℃水浴保温 5 分钟,然后全部转移到新的 1.5mL 塑料离心管中(此时匀浆液较为粘稠,可将枪头剪去一截后转移上清,植物碎片可倒入)。
4. 12000-15000 g 室温离心 3 分钟,将上清转移到新的 1.5mL 塑料离心管中(上清液的体积一般为 200-700 µL,如果体积超过 700 µL,多余部分可以不要)。有的上清液中会有少量细小块状物,但对后续操作没有影响,不必进行特殊处理。
5. 在上清液中加入等体积的溶液 B,上下颠倒 30 秒充分混匀(溶液将呈白色混浊状),然后置冰浴中 5 分钟。
6. 12000-15000 g 室温离心 3 分钟,转移上清到新离心管中。
7. 加入 0.2 mL 的氯仿(自备),震荡器上充分振荡 30 秒混匀。
8. 12000-15000 g 室温离心 3 分钟,两相交界面将有白色膜状物。小心转移上清到新离心管中。
9. 重复氯仿抽提步骤一次,此步可以有效去除含色素物质。
10. 加入 0.6-1 倍体积的异丙醇(自备),上下颠倒 30 秒混匀。
11. 12000-15000 g 离心 5 分钟,弃上清,管底将有微小 DNA 沉淀。
12. 沉淀用 75%乙醇清洗 2 次后,室温晾干。
13. 加入 50-100 µL 自备缓冲液(如 TE)溶解沉淀。DNA 即可用于电泳,酶切和PCR 等反应。如果需要测 OD,则必须乙醇沉淀去除降解的 RNA。注意:用本
产品提供的 RNase 处理 DNA 样品时,做好按《分子克隆手册》等参考书上的
方法彻底去除其中的 DNase。
Flos mume梅花探针法PCR鉴定试剂盒 使用效果:
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高通量、低成本SNP、突变或甲基化检测方法—HRM 技术应用
细胞中1 个突变细胞,适用于手术和其它微量组织中突变检测。检测灵敏性远高于“PCR+ 测序”的25% ,即100 个正常细胞中至少有25 个突变细胞,测序仅适用手术组织。 • 特异性好:PCR 产物无需后续处理,特异性高达100% 。直接未知杂合突变鉴定准确性100%,特异性100% 。直接未知纯合突变鉴定准确性96%, 利用非标记探针快速基因分型法直接未知纯合子鉴定准确性100%。 • 重复性好:重复性100% • 使用范围广:不受碱基位点局限,除可检出已知突变外,也能检测出未知突变。
— real-time PCR,针对miRNA的real-time PCR与常规的real-time 有所不同。 目前有的公司提供的是探针法试剂,有的是SYBR Green法试剂,因探针法试剂成本较高,丁香通在此挑选出SYBR Green法的代表作 — QIAGEN公司的完整的一套miRNA定量试剂miScrip system来介绍,这次比起其他进口品牌同系列的产品,QIAGEN价格倒是不贵。 第一步是miRNA的提取,核酸提取无疑是QIAGEN公司的绝活,对于miRNA这样的小分
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