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99% 的人不知道的 PCR 耗材小机密！

童鞋们都知道，要想成为真正的 PCR 达人，并非易事。一个小小的环节都可能让整个实验挂掉，也正是因此，PCR 成为了资深科研者们心中的痛。 不要说实验本身，其实就连实验的耗材都隐藏着大学问，工欲善其事，必先利其器。 今天我们就具体来说下 PCR 耗材中选择选择反应板的问题。 PCR 板通常采用 96 孔和 384 孔的形式，其次为 24 孔和 48 孔。使用的 PCR 仪和正在进行的应用的性质将决定 PCR 板是否适合您的实验。 裙边 PCR 板的“裙”是板周围的板。裙边可为反应体系构建时

PCR反应仪器、耗材的重要性

(10kb内） Tm值=4(G+C) +2(A+T) 循环次数 ：一般为25 ～ 30次。循环数决定PCR扩增的产量。模板初始浓度低，可增加循环数以便达到有效的 扩增量。但循环数并不是可以无限增加的。一般循环数为30个左右，循环数超过30个以后，DNA聚合酶活性逐渐达到饱和，产物的量不再随循环数的增加而增 加，出现了所谓的“平台期”。 PCR反应中耗材和仪器的重要性： 因PCR反应的精密度，使得在此过程中，耗材和仪器的辅助作用非常重要，如Tip的准度和残留度；PCR tube的密封

荧光定量 PCR 异常扩增曲线分析攻略

图七：光学扭曲结果图及 ROX 均一化结果图 除了耗材外，跟仪器配套使用的配件也要检查是否使用正确，比如 QuantStudio 5 配套的 8 联管托架，在使用的时候只用托架的下半部分，如果忘记把上半部分取下，有可能会影响扩增（图八），具体 Applied Biosystems™ 系列的荧光定量 PCR 仪器配件对应使用情况，可参考之前的文章《贴士：正确使用荧光定量仪器配件和耗材（更新版）》。 图八：未将托架上半部分取下，造成有些靶标未扩增 3、确定所用试剂是否正常 如果设置都正确，耗材