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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃ 至 -80℃
- 保质期:
12个月
- 英文名:
Human VLDLR qPCR primer pairs
- 库存:
99
- 供应商:
北京义翘神州科技股份有限公司
- 规格:
1 Unit
反应种属:Human
引物靶点:VLDLR
引物保存条件:The lyophilized product is stable for one year from date of receipt when stored at -20℃. The suspended product is stable for six months from date of receipt when stored at -20℃.
GeneBank ID:
序列长度:0
引物描述:Verified forward and reverse primers for analyzing the quantitative expression of gene
引物质控信息:The primer mix has been verified to generate satisfactory qPCR data on Roche LightCycler480
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文献和实验一般来讲,进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液,只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高,所以每个样品至少要做3个平行孔,以防在后面的数据分析中,由于Ct相差较多或者SD太大,无法进行统计分析。通常来讲,反应体系的引物终浓度为100-400mM;模板如果是总RNA一般是10ng-500,如果cDNA,通常情况下是1ul或者1ul的10倍稀释液,要根据目的基因的表达丰度进行调整。当然这些都是经验值,在操作过程中,还需要根据所用
做一个特异性验证。另外,每次试验的 NTC(no template control)是一定要做哒! (3)只有引物二聚体,无目的条带 如果扩增片段过短(小于 80bp),那么仅通过融解曲线就很难区分引物二聚/目的条带。 另外,也有可能是 qPCR 扩增效率低或者没有扩增,体系里边只有引物纠缠成的二聚体了。 总之,产物长度建议大家还是设置在 100 - 200 bp,不要太短了。
Real-time qPCR 手册——手把手教你从菜鸟到高手
方程: 从线性方程上看,斜率(slope)为 -1/lg(1+E),所以 E = 10-1/slope-1。如果从标准曲线上得到斜率(-3.3),就可以算出扩增效率(0.99)。一般来讲PCR扩增效率在 90%-110% 都是可以用于数据分析的。效率低于 100%,是由于 PCR 反应中存在抑制因素;而高于 100% 可能一些污染、非特异性扩增或者是引物二聚体造成。 3. Real-time qPCR 的种类 根据 real-time qPCR 的化学发光原理可以分为2大类:一类为探针类,包括
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