- ￥1770
- Sino Biological
- 北京
- VG40245-NF
- 2025年08月12日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃ to -80℃
- 保质期：
3个月
- 英文名：
HIV-1 vif Gene ORF cDNA clone expression plasmid, N-Flag tag
- 库存：
99
- 供应商：
北京义翘神州科技股份有限公司
- 规格：
1 Unit
基因靶点：HIV-vif
反应种属：HIV
应用说明：Stable or Transient mammalian expression
cDNA描述：Full length Clone DNA of HIV-1 (group M, subtype B, strain HXB2) vif with N terminal Flag tag.
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文献和实验敲入：CRISPR KI 特定场景的基因组定点整合：转座子或 CRISPR 敲入 转染效率很高的细胞（如 293T、HeLa）：质粒筛选也可行，但周期和均一性不如慢病毒方案 --- 一、方法一：慢病毒介导（目前最主流） 原理：将目的基因或干扰序列克隆到带抗性基因（如 puromycin 抗性）的慢病毒载体上，病毒感染目的细胞后，RNA 反转录为 DNA 并整合到宿主基因组，随细胞分裂稳定传递，再用抗生素筛选出阳性细胞。 典型流程： 载体设计：根据实验目的确定启动子、荧光标签、融合标签
会怎样"用 CRISPRa。 --- 一、机制差异决定了两者能回答的问题不同 过表达质粒（cDNA / ORF） 外源启动子（CMV、EF1α 等）驱动，表达量与内源调控完全脱钩； 通常只包含单一 CDS，不含内含子和 UTR； 表达量可达到内源的几十到几百倍； 可携带标签（FLAG、HA、GFP）方便检测。 CRISPRa（dCas9-VP64 / VPR / SAM / SunTag） 失活 Cas9（dCas9）融合转录激活域，被 gRNA 引导至靶基因启动子区； 激活的是内源位点，转录本包含完整的内含
蛋白，其融合表达目的蛋白后具有以下优点：1.FLAG作为融合表达标签，其通常不会与目的蛋白相互作用并且通常不会影响目的蛋白的功能、性质，这样就有利用研究人员对融合蛋白进行下游研究。2.融合FLAG的目的蛋白，可以直接通过FLAG进行亲和层析，此层析为非变性纯化，可以纯化有活性的融合蛋白，并且纯化效率高。3.FLAG作为标签蛋白，其可以被抗FLAG的抗体识别，这样就方便通过Western Blot、ELISA等方法对含有FLAG的融合蛋白进行检测、鉴定。4.融合在N端的FLAG，其可以被肠激酶切除（DDDK
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