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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃ to -80℃
- 保质期:
3个月
- 英文名:
Mouse Myoglobin Gene ORF cDNA clone expression plasmid, C-His tag
- 库存:
99
- 供应商:
北京义翘神州科技股份有限公司
- 规格:
1 Unit
基因靶点:MB
反应种属:Mouse
应用说明:Stable or Transient mammalian expression
cDNA描述:Full length Clone DNA of Mouse myoglobin with C terminal His tag.
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文献和实验,或者可以表达以产生重组蛋白。pET-32α(+)载体系列用于表达与109 aa Trx•Tag™硫氧还蛋白融合的肽序列。它属于一种表达系统,可在其激活后产生所需的蛋白质。插入原核宿主细胞。原核细胞如大肠杆菌因为它们廉价,快速的生物量积累和简单的工艺规模扩大,因此是外源蛋白表达的首选宿主。在本文中,我们将重点总结这种在我们的实验室中使用的有用技术。表达后pET-32α(+)载体的构建,蛋白质表达和蛋白质纯化将在本文中详细描述。获得用于构建载体的外源DNA片段插入载体的DNA通常可以使用聚合酶链式反应(PCR
库。 克隆资源因为已克隆到Gateway改造过的载体,所以可以快速地将基因转到各种表达系统中。 图4 进入Gateway系统的各种路线 * 目前的克隆资源带有attB位点,需要与pDONR质粒重组五、触手可及的最高级表达系统 一旦您构建好Gateway入门克隆,蛋白表达和分析的大门就会向您敞开。使用Gateway技术,您可以进入到几乎是无数种的表达系统。因为没有一个单一的表达系统蛋白适合于每一种蛋白,优化基因表达的最好方法是在多个系统中分析您的蛋白(图5)。 图5 在Gateway
对宿主细胞具有毒性,从而选择抗毒性的表达系统;怎样选择表达系统,是大肠杆菌表达系统,酵母表达系统还是CHO细胞表达系统,不同的表达系统和培养方法显著影响下游的处理过程,目标蛋白表达的定位(胞内、细胞内膜、周质空间和胞外),蛋白表达的量都依赖于所选择的表达系统;蛋白的化学性质,是否容易被蛋白酶降解,是否会和一些金属离子,化学成分发生反应;蛋白的物理性质,是否对温度敏感等。从蛋白基因的获取,蛋白基因的克隆,蛋白的表达,做好一个整体的规划,将对纯化工作的方便快捷高效带来关键的影响。基因工程构建的纯化标记
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