Sino Biological 人SMIM22表达质粒 哺乳动物稳定或瞬时表达 哺乳细胞过表达质粒

细胞自噬发生与检测

蛋白转位至自噬体膜，在荧光显微镜下形成多个明亮的绿色荧光斑点，一个斑点相当于一个自噬体，可以通过计数来评价自噬活性的高低。 mRFP-GFP-LC3 双荧光自噬指示体系： mRFP-GFP-LC3 融合蛋白的病毒产品 mRFP 用于标记及追踪 LC3，GFP 的减弱可指示溶酶体与自噬小体的融合形成自噬溶酶体。由于 GFP 荧光蛋白对酸性敏感(pH 敏感)，当自噬体与溶酶体融合后 GFP 荧光发生淬灭,而 mRFP 相对稳定，因此只能检测到红色荧光。 1. 哺乳动物 LC3 表达质粒

在大肠杆菌中高效表达外源蛋白的策略

终止子在表达质粒的构建过程中常被忽略，但有效的转录终止子是表达载体必不可少的元件，因为它们具有极其重要的作用。贯穿启动子的转录将抑制启动子的功能，造成所谓的启动子封堵[64]。这种效应可以通过在编码序列下游的适当位置放置一转录终止子，阻止转录贯穿别的启动子来避免。同样地，在启动目的基因的启动子上游放置一转录终止子，将最大限度地减小背景转录[65]。另有资料证明，由强启动子启动的转录会使转录通读到复制区，造成控制质粒拷贝数的ROP蛋白的过量表达，从而导致质粒的不稳定[66]。另外，转录终止增强mRNA的稳定

【转帖】RNA干扰技术研究进展及其应用

降解和基因表达受抑。研究结果表明，RNAi广泛存在于各种生物体，植物、真菌、锥虫、果蝇和哺乳动物中都发现了RNAi现象(Agami，2002)。自然界中，RNAi可能是动植物体内的一种保护机制，主要作用在于防御病毒感染，维持基因组中转座子的稳定，参与胚胎发育等。RNAi的具体机制和过程尚未十分清楚，可能的作用机制是细胞内双链RNA在Dicer酶的作用下，可形成22 bp大小的siRNA，siRNA可进一步掺入多部分核酸酶(multicomponent nuclease，RISC)并使其激活