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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃ to -80℃
- 保质期:
3个月
- 英文名:
Human ZNF581 Gene ORF cDNA clone expression plasmid
- 库存:
99
- 供应商:
北京义翘神州科技股份有限公司
- 规格:
1 Unit
基因靶点:ZNF581
反应种属:Human
应用说明:Stable or Transient mammalian expression
cDNA描述:Full length Clone DNA of Human zinc finger protein 581
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文献和实验会怎样"用 CRISPRa。 --- 一、机制差异决定了两者能回答的问题不同 过表达质粒(cDNA / ORF) 外源启动子(CMV、EF1α 等)驱动,表达量与内源调控完全脱钩; 通常只包含单一 CDS,不含内含子和 UTR; 表达量可达到内源的几十到几百倍; 可携带标签(FLAG、HA、GFP)方便检测。 CRISPRa(dCas9-VP64 / VPR / SAM / SunTag) 失活 Cas9(dCas9)融合转录激活域,被 gRNA 引导至靶基因启动子区; 激活的是内源位点,转录本包含完整的内含
细胞的 cDNA, 用 PCR 的方法扩增出抗体基因,以分泌 scFv 或 Fab 的形式克隆到噬菌体载体中。5. DNA 结合蛋白研究噬菌体展示技术可以用于创造一个大的、具有识别不同 DNA 序列的锌指的多肽库。利用这个多肽库,可以研究有关氨基酸序列与 DNA 结合位点之间的识别规则,可以通过设计锌指多肽去控制基因的表达,比如抑制小鼠细胞系中的癌基因,也可以启动表达质粒的基因,或干扰病毒感染周期。6.信息传递研究从多肽库中可分离到与天然激素相似的,与受体结合的高亲和力的多肽,因此用完整细胞可以从多肽库中找到
shRNA表达质粒多采用RNA聚合酶III启动子,如人源H1或鼠源U6启动子,pol III在哺乳动物细胞(绵羊是哺乳动物)内引导非编码小RNA的转录,转录产物无poly(A)尾,且在转录过程中遇到连续4-5个U时转录终止。此载体最后转录出的产物是经折叠形成的发夹状小RNA(shRNA); shRNA 在细胞内被Dicer酶切割成3’端带有两个U突出的siRNA,进而启动RNAi,介导基因沉默。载体中的间隔序列为9个核苷酸时最为有效。 是可行的! 高成胡君
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