- ￥1770
- Sino Biological
- 北京
- HG25482-UT
- 2025年08月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃ to -80℃
- 保质期：
3个月
- 英文名：
Human DEFB105B Gene ORF cDNA clone expression plasmid
- 库存：
99
- 供应商：
北京义翘神州科技股份有限公司
- 规格：
1 Unit
基因靶点：DEFB105B
反应种属：Human
应用说明：Stable or Transient mammalian expression
cDNA描述：Full length Clone DNA of Human defensin, beta 105B
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文献和实验发表[1，2，3]。国内针对外源基因在原核细胞中高效表达的关键因素，构建了高效表达载体[4]，并在此基础上成功表达了一系列细胞因子的基因[5，6，7]。我们在分析了国内外有关在原核系统中表达蛋白的实验资料的基础上，对在大肠杆菌中高效表达外源蛋白的策略所涉及的内容进行全面的总结，以期有助于我国在这方面的研究。 1.有效表达载体的构型 构建表达质粒需要多种元件，需要仔细考虑它们的组合，以保证最高水平的蛋白质合成。E.coli 表达载体的基本结构[8]。 启动子(以杂和的tac 启动子为例
。二、操作步骤（一）获得目的基因1、通过PCR方法：以含目的基因的克隆质粒为模板，按基因序列设计一对引物（在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点），PCR循环获得所需基因片段。2、通过RT-PCR方法：用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA，以mRNA为模板，逆转录形成cDNA第一链，以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物。（二）构建重组表达载体1、载体酶切：将表达质粒用限制性内切酶（同引物的酶切位点）进行双酶切，酶切产物行琼脂糖电泳后，用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。2、PCR
增加质粒稳定性，如将rrnB转录终止子插入上述强启动子远处，增加质粒在细胞中稳定性。 C、外源基因表达与否对表达质粒稳定性的影响 在克隆基因表达阻断条件下，生长200代，质粒结构是稳定的。在外源基因表达情况下，传100代，只有10％质粒具有外源基因的功能。 2、转录水平 1)强启动子 A. lpp启动子相对强，trp启动子比lac强，tac启动子比lac UV5启动子强11倍，比trp强3倍。 B.启动子串联：连续三个trp启动子比单个trp启动子表达水平高4－5倍。 C. trp启动
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