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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃ to -80℃
- 保质期:
3个月
- 英文名:
Human DLC1 Gene ORF cDNA clone expression plasmid
- 库存:
99
- 供应商:
北京义翘神州科技股份有限公司
- 规格:
1 Unit
基因靶点:DLC1
反应种属:Human
应用说明:Stable or Transient mammalian expression
cDNA描述:Full length Clone DNA of Human deleted in liver cancer 1
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文献和实验构建全长cDNA文库分为噬菌体文库和质粒文库,二者大同小异。无论怎样,应当注意如下几个方面: 一、保证获得数量足够的高质量的起始RNA。 构建cDNA文库要求的RNA量比做RACE和Northern blot的要多,在材料允许的情况下一般的 试剂 盒均推荐采用纯化总mRNA后进行反转录,这比直接采用总RNA进行反转录而构建的cDNA文库好,虽然后者也并不是不能做。老版本CLONTECH
外源基因片段长度约10kb。将外源基因插入到MCS中,随质粒的表达而表达,增殖而扩增。外源基因插入到MCS后,β-半乳糖苷酶的活性丧失而不显兰色-白色菌落。如果不插入外源基因,则产生兰色。从而筛选阳性菌落。 (二).λ-噬菌体(λphage) 是一种可在体外包装的细菌病毒,可高效感染大肠杆菌.λ-噬菌体DNA是线状双链DNA分子,全长约50kb,每条链各带12bp长的单链互补末端-粘末端(COS序列)。进入宿主细胞后不久,COS序列碱基配对环化。 改建后的λ噬菌体发展了多种较大型的克隆
以上,这时其ORF超过3000bp,做高保真PCR有难度。注:基金申请中,有时看到申请者人无意识的选做的恰就是大分子量蛋白,可谓不知者者无畏)。 5、但事实上真正的困难还是在于基因的外源表达和功能/活性等后续检测。 所以,建议你先做基因表达检测,然后选择性的再做基因克隆表达。 首先非常感谢这么细致的回复。 我想知道,基因克隆到绿色阳光蛋白载体中,转染细胞后,是否在细胞中看到绿色荧光蛋白就可以认为目的蛋白表达了,还需要进行抗体
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