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生物芯片入门（四）：基因表达谱芯片实验操作2

0.9，而CCD-扫描仪的数值孔径为0.2～0.5。有其他类型的扫描仪不用目镜而是使用积分球面镜来采集释放的部分光源，但是部分光线经过多次球面反射而衰减。还有一些无散光收集装置，仅仅是将探测器放在样品的某一区域的上方，光线采集的效率受限于样品被照明处的范围及探测器的视角，例如，一个直径为25mm的探测器放在激发点上方100mm处，其实际的有效数值孔径为0.12。图2显示目镜的不同数值孔径与光采集效率的关系。 图2 目镜的不同数值孔径与光采集效率的关系 空间定位 是指对样品上的某一小区域上的荧

肿瘤成球实验以及肿瘤球体增殖/活力检测方案

方法。 收获细胞（保证健康的单细胞悬液）。 使用胰蛋白酶-EDTA 溶液 ( T3924 ) 分离上述贴壁细胞。Millicell® Digital Cell Imager（MDCI10000）观察到细胞融合度应为80-90%，且状态良好。 以300 x g离心细胞悬液 5分钟并吸出上清液。将细胞重悬于少量培养物中，例如 3-5 mL 的 3dGRO™ 球状体培养基 ( S3077 ) 注：可让细胞穿过40 µM细胞过滤器或带细胞过滤器卡扣盖的5 mL 圆底聚苯乙烯试管，以实现单细胞悬浮。

流式细胞术 | 流式单细胞设门及5种常见错误

聚集等。 处理此类样品时，上机前使用70-100μm滤网过滤至关重要，可有效去除天然聚集体。若过滤后仍有残留，则需借助流式分析中的单细胞门控策略（如FSC-A与FSC-H设门）进一步排除，以确保检测数据的准确性。   单细胞门控（Singlet gate） 基本原理黏连体排除的核心在于利用激光脉冲信号的几何特性差异。 当细胞通过激光束时，探测器会生成包含高度（H）、宽度（W）和面积（A）的电压脉冲。单细胞通常产生对称的高斯脉冲，其面积与高度、宽度成正比。 相比之下，黏连体（如两个细胞串联）通过激